MDCK細胞（NBL-2細胞犬腎細胞）

MDCK（Madin-Darby Canine Kidney）細胞係最早由S.H. Madin和N.B. Darby於(yu) 1958年從(cong) 一隻成年雌性美國可卡犬的腎髒組織中分離。MDCK細胞來源於(yu) 犬腎髒的上皮細胞，最初用於(yu) 研究病毒感染的機製，尤其是在流感病毒等病原體(ti) 的研究中表現出重要的應用價(jia) 值。

MDCK [NBL-2] 細胞係展現了顯著的上皮細胞特征，具有較強的貼壁生長能力。MDCK [NBL-2] 細胞的一個(ge) 顯著特點是其在工業(ye) 生物技術和毒理學研究中的應用潛力，尤其在藥物篩選和毒性評估中具有重要的應用價(jia) 值。因其易於(yu) 培養(yang) 且對多種病毒具有敏感性，MDCK [NBL-2] 也常用於(yu) 病毒的擴增和生產(chan) ，成為(wei) 轉染與(yu) 基因表達研究的重要工具。

MDCK細胞（NBL-2細胞犬腎細胞）特性特征

• 形態：MDCK細胞呈多邊形或紡錘形，能夠在培養(yang) 基中形成緊密的單層結構。

• 模態染色體(ti) 數目：MDCK細胞的模態染色體(ti) 數目為(wei) 78，範圍在77到80之間，屬於(yu) 超二倍體(ti) 。

• 染色體(ti) 分布：染色體(ti) 數目呈雙峰分布，且大多數傳(chuan) 播中存在一條正常的X染色體(ti) 。

• 角蛋白表達：MDCK細胞通過角蛋白免疫過氧化物酶染色呈陽性。

• 病毒易感性：MDCK細胞係對多種病毒具有敏感性，包括人柯薩奇病毒B5、腺相關(guan) 病毒4、痘苗病毒；水皰性口炎病毒；腺相關(guan) 病毒5；人柯薩奇病毒B3；人柯薩奇病毒B4；人脊髓灰質炎病毒2型。

• 流體(ti) 運輸：MDCK細胞能夠形成單層上皮結構，並具備流體(ti) 運輸功能，這使其成為(wei) 研究腎小管功能的重要模型。
  

• 自組織能力：在三維培養(yang) 條件下，MDCK細胞能夠自我組織形成空心球結構，展現出良好的生物學特性

MDCK細胞參數表

MDCK細胞（NBL-2細胞犬腎細胞）培養教程

細胞複蘇

• 將凍存的MDCK細胞從(cong) 液氮罐中取出，並迅速放入37℃水浴中解凍。

• 細胞解凍後，立即將MDCK細胞懸液加入預製的完全培養(yang) 基中，混勻後進行離心（1000 rpm，5分鍾），去除冷凍保存液。

• 棄去上清液後，使用新鮮的完全培養(yang) 基重懸MDCK細胞，並將其轉移至培養(yang) 瓶中。

• 將重懸後的MDCK細胞接種至培養(yang) 瓶中，推薦的接種密度為(wei) 每毫升培養(yang) 基中接種1-5 × 10^5個(ge) 細胞。

• 將培養(yang) 瓶放置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) ，確保MDCK細胞在最佳生長條件下維持。

細胞傳代

• 當MDCK細胞生長至80%-90%密度時進行傳(chuan) 代。

• 用PBS緩衝(chong) 液清洗細胞，去除殘餘(yu) 的培養(yang) 基及死細胞。

• 使用消化液（如胰酶和EDTA）處理細胞，通常需要1-3分鍾，觀察到細胞逐漸變圓後停止消化。

• 加入等體(ti) 積的完全培養(yang) 基，輕輕吹打使MDCK細胞分散。

• 離心（1000 rpm，5分鍾），去除上清液後，重懸細胞並進行傳(chuan) 代，常用的傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2至1:3。

細胞凍存

• MDCK細胞在健康生長狀態且達到適當密度時可進行凍存。

• 將10% DMSO與(yu) 10% FBS混合，按照1:1比例加入細胞懸液中作為(wei) 冷凍保護液。

• 將混合液分裝至凍存管中，並逐步將細胞懸液降溫至-80℃，或直接轉移至液氮罐中進行長期保存。

注意事項

• 無菌操作：整個(ge) 培養(yang) 過程必須在無菌環境下進行，所有器材和耗材都要嚴(yan) 格消毒，避免汙染。

• 培養(yang) 基更換：每2-3天更換一次培養(yang) 基，保持MDCK細胞在最佳生長狀態。

• 細胞生長監控：定期觀察MDCK細胞形態，確認其處於(yu) 健康狀態，避免細胞過度擁擠或處於(yu) 應激狀態。

• 傳(chuan) 代比例：初次傳(chuan) 代時建議采用較小的傳(chuan) 代比例（如1:2），避免細胞過度稀釋，保證其生長速度。

• 凍存與(yu) 複蘇：MDCK細胞凍存時應確保冷凍保護液充分混勻，避免凍存過程中細胞受損。複蘇時應盡量減少解凍時間，避免細胞受到熱衝(chong) 擊。