
Jurkat, Clone E6-1細胞是一種來源於(yu) 急性T淋巴細胞白血病的假二倍體(ti) 人類細胞係,由Schneider博士在1984年建立,源自一名14歲男性患者的外周血樣本。E61細胞為(wei) Jurkat-FHCRC細胞株的克隆衍生物,專(zhuan) 門用於(yu) 研究免疫係統疾病以及免疫學和免疫腫瘤學。
Jurkat, Clone E6-1細胞具有T淋巴細胞的特性,具有46條染色體(ti) (核型46,XY,-2,-18,del(2)(p21p23),del(18)(p11.2)),其中74%的細胞具有模式染色體(ti) 數目,5.3%的細胞為(wei) 多倍體(ti) 。E61細胞係不含支原體(ti) 汙染,且大部分細胞具有正常的X和Y染色體(ti) 。
E61細胞特性特征
抗原表達:E61細胞係表達T細胞表麵抗原CD3。Jurkat細胞係表達T細胞抗原受體(ti) (TCR)。
白細胞介素-2(IL-2):Jurkat, Clone E6-1細胞能夠在佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體(ti) 的刺激下產(chan) 生大量IL-2,這使其成為(wei) 研究T細胞功能和信號傳(chuan) 導的重要模型。
E61細胞參數表
細胞名稱 | Jurkat, Clone E61細胞(人T淋巴細胞白血病細胞) |
別稱 | Jurkat E6-1; Jurkat; Clone E6-1; Jurkat Clone E6-1; JURKAT E-6.1; JURKAT E-61; Jurkat-E6; Jurkat E6; J.E6-1; E6-1 |
來源 | 急性T淋巴細胞白血病,來自14歲男性的外周血 |
細胞類型 | 腫瘤細胞(T淋巴細胞) |
細胞形態 | 淋巴母細胞樣 |
生長特性 | 懸浮生長 |
倍增時間 | 24-48小時 |
細胞直徑 | 10-16 μm |
抗原表達 | CD3 |
基因表達 | 白細胞介素-2(IL-2) |
T細胞受體 | 表達T細胞抗原受體(TCR) |
生物安全等級 | 1 |
汙染檢測 | 無支原體、細菌、真菌汙染 |
推薦培養基 | RPMI 1640 + 10% FBS + 1% P/S |
培養條件 | 37℃,5% CO₂ |
換液周期 | 每2-3天 |
培養基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2 - 1:4(視細胞生長速度及密度而定) |
細胞濃度 | 2 × 10^5 到 1 × 10^6 細胞/ml |
培養環境 | 空氣95%,二氧化碳5% |
pH範圍 | 7.2 - 7.4 |
凍存液配方 | 92% FBS + 8% DMSO |
細胞表麵標記 | CD3、CD4、CD8 |
細胞因子 | IL-2、IL-6、TNF-α |
信號通路 | NF-κB、MAPK、PI3K/Akt信號通路 |
轉染效率 | 高(適合基因功能研究) |
研究用途 | 免疫係統疾病研究,免疫學和免疫腫瘤學研究 |
特定應用 | IL-2產生實驗,細胞信號傳導研究,轉染實驗,細胞毒性研究 |
其他應用 | 細胞獨立遞送機製研究,藥物篩選,幹擾素表達研究 |
培養教程
Jurkat, Clone E61人T淋巴細胞白血病細胞培養教程
E61細胞複蘇
從(cong) 液氮中取出E61細胞的凍存管,迅速放入37℃水浴中解凍,期間輕輕搖動凍存管以加速解凍。
解凍完成後,立即將E61細胞懸液轉移至含有預熱的完全培養(yang) 基(RPMI 1640 + 10% FBS + 1% P/S)的15ml離心管中,緩慢加入5ml培養(yang) 基以稀釋並去除DMSO。
以1200rpm離心5分鍾,小心棄去上清。
用5ml預熱的完全培養(yang) 基重懸E61細胞沉澱,然後轉移到T25培養(yang) 瓶中。
加入足量完全培養(yang) 基,使總容量達到10-12ml。
將E61細胞置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。
E61細胞常規傳代
每2-3天進行一次傳(chuan) 代,當E61細胞密度達到1-2 × 10^6 cells/ml時,開始傳(chuan) 代操作。
輕輕吹打E61細胞懸液,以確保形成單細胞懸液。
將E61細胞懸液轉移至15ml離心管中,以1200rpm離心5分鍾。
棄去上清,用預熱的完全培養(yang) 基重懸E61細胞沉澱。
根據需要的傳(chuan) 代比例(通常為(wei) 1:2至1:4)將E61細胞懸液分配至新的培養(yang) 瓶中。
加入適量的預熱完全培養(yang) 基,總體(ti) 積保持在10-12ml。
繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) E61細胞。
E61細胞凍存
將E61細胞懸液轉移至15ml離心管中,以1200rpm離心5分鍾。
棄去上清,用凍存液(92% FBS + 8% DMSO)重懸E61細胞沉澱,使E61細胞濃度達到2-3 × 10^6 cells/ml。
將重懸的E61細胞分裝至預冷的凍存管中,每管1ml。
使用程序凍存機或泡沫盒在-80℃冰箱中進行程序性冷凍E61細胞。
24小時後,將凍存管轉移至液氮罐中長期保存E61細胞。
注意事項
傳(chuan) 代和操作過程中要避免E61細胞過度消化,並輕柔處理以減少氣泡的產(chan) 生。
定期檢查E61細胞的生長狀態,確保E61細胞處於(yu) 對數生長期。
定期進行支原體(ti) 、細菌、和真菌檢測,確保E61細胞培養(yang) 環境無汙染。
轉染技術優化E61細胞中IL-2表達的步驟
選擇轉染試劑:可選擇使用脂質體(ti) 轉染試劑(如Lipofectamine 2000或JetPEI)或電轉法,具體(ti) 選擇取決(jue) 於(yu) 實驗需求及E61細胞的狀態。
準備轉染質粒:構建含有IL-2基因的表達質粒,並確保使用適當的啟動子(如CMV啟動子)以驅動E61細胞中IL-2的表達。
轉染過程
按照轉染試劑的說明書(shu) ,準備轉染複合物(通常是將轉染試劑與(yu) 質粒DNA混合,靜置一段時間以形成複合物)。
將轉染複合物加入重懸的E61細胞中,輕輕混勻。
將混合液轉移至培養(yang) 瓶中,繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) E61細胞。
E61細胞中IL-2表達誘導:轉染後24-48小時,加入佛波酯和抗T3單克隆抗體(ti) ,刺激E61細胞以誘導IL-2的表達。
E61細胞中IL-2表達檢測:通過ELISA、流式細胞術或實時定量PCR(qPCR)等方法檢測E61細胞中IL-2的表達水平。
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