Karpas-299細胞（人間變性大細胞淋巴瘤細胞）

Karpas-299細胞係是在1986年從(cong) 一名25歲患有T細胞非霍奇金淋巴瘤的男性患者的外周血中分離。karpas299細胞係後來被歸類為(wei) CD30陽性的間變性大細胞淋巴瘤（ALCL），其特征是攜帶NPM-ALK融合基因。karpas299細胞係的建立為(wei) 研究間變性大細胞淋巴瘤提供了重要的實驗工具。

Karpas-299細胞特性

• karpas299細胞形態學上表現為(wei) 淋巴母細胞樣，生長呈懸浮狀態

• 細胞學和免疫表型分類為(wei) CD30陽性的間變性大細胞淋巴瘤

• 分子遺傳(chuan) 學特征為(wei) 攜帶NPM-ALK融合基因，是一種ALK陽性的細胞係

Karpas-299細胞參數表

Karpas-299人間變性大細胞淋巴瘤細胞培養教程

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出Karpas299細胞凍存管，迅速置於(yu) 37℃水浴中解凍，期間輕輕搖動凍存管以加快Karpas299細胞的解凍速度。
  

• 預先準備4mL的完全培養(yang) 基（RPMI 1640培養(yang) 基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素/鏈黴素（P/S））用於(yu) Karpas299細胞的複蘇。

• 將解凍後的1mL Karpas299細胞懸液緩慢加入到4mL的完全培養(yang) 基中，輕輕混勻，以減少Karpas299細胞的損傷(shang) 。
  

• 以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液以去除DMSO，保留Karpas299細胞沉澱。
  

• 加入1-2mL的完全培養(yang) 基，輕輕重懸Karpas299細胞。
  

• 將重懸的Karpas299細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，或在10cm培養(yang) 皿中加入約8mL培養(yang) 基，靜置培養(yang) Karpas299細胞過夜，以恢複細胞活性。
  

細胞傳代

• 次日檢查Karpas299細胞生長情況，若細胞密度達到80%-90%，可進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去舊培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS輕輕潤洗Karpas299細胞1-2次，以去除殘留的FBS和其他幹擾物。
  

• 加入1mL的0.25%胰蛋白酶和0.53mM EDTA混合液，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，直到Karpas299細胞變圓並開始脫落。
  

• 加入適量的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕混勻Karpas299細胞懸液。
  

• 以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液，保留Karpas299細胞沉澱。
  

• 向Karpas299細胞沉澱中加入6-8mL的完全培養(yang) 基，輕輕混勻。
  

• 將Karpas299細胞懸液按1:2的比例分裝至新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，補充8mL的培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。
  

細胞凍存

• 選擇生長狀態良好的Karpas299細胞進行凍存操作。棄去培養(yang) 基後，用PBS清洗Karpas299細胞。
  

• 加入1mL胰酶，待Karpas299細胞變圓且脫落後，加入1mL含血清的培養(yang) 基終止消化。
  

• 以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液，保留Karpas299細胞沉澱。
  

• 加入1mL血清重懸Karpas299細胞，並按照細胞數量加入DMSO，使終濃度為(wei) 10%。確保Karpas299細胞密度不低於(yu) 1×10^6/mL。
  

• 將Karpas299細胞懸液迅速分裝到已標記好的凍存管中。
  

• 將凍存管放入程序凍存盒中，置於(yu) -80℃冰箱中過夜，第二天轉入液氮中長期保存Karpas299細胞。

• 如果沒有程序凍存盒，可將Karpas299細胞凍存管放置在泡沫盒中，先在4℃靜置5-10分鍾，再轉入-20℃靜置2小時，最後移入-80℃冷凍過夜。
  

注意事項

• 培養(yang) 條件：保持37℃、5% CO2和飽和濕度的培養(yang) 環境，以確保Karpas299細胞的正常生長。

• 換液周期：每2-3天更換培養(yang) 基，以維持適宜的營養(yang) 環境和pH值，確保Karpas299細胞的健康生長。

• Karpas299細胞狀態監測：定期檢查Karpas299細胞狀態，尤其注意汙染和形態異常。如發現汙染，需立即采取措施處理。

• 操作輕柔：操作過程中應盡量輕柔，避免產(chan) 生氣泡，以免影響Karpas299細胞的生長和狀態。