TOLEDO細胞（人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞）

Toledo人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞係（Toledo DLBCL）是一種廣泛應用於(yu) 非霍奇金淋巴瘤研究的重要細胞係。TOLEDO細胞於(yu) 1990年從(cong) 一名患有彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）的成年女性患者的外周血中分離，患者在經曆了高劑量化療和骨髓移植後，發展為(wei) 腦部淋巴瘤。盡管Toledo細胞的形態特征類似於(yu) 伯基特淋巴瘤細胞，但TOLEDO細胞缺乏伯基特淋巴瘤特有的染色體(ti) 易位，並顯示出多種染色體(ti) 畸變。TOLEDO細胞是研究非霍奇金淋巴瘤及其治療的寶貴模型。

TOLEDO細胞特性特征

• 抗原表達: TOLEDO細胞表達CD10、CD19、CD20、CD38，但不表達CD23和CD39。

• 免疫表型: Toledo細胞不表達表麵或細胞質免疫球蛋白。

• 細胞特性: Toledo細胞在體(ti) 外培養(yang) 中呈現出懸浮生長的特性，並且形態上與(yu) B淋巴母細胞相似。

• TOLEDO細胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色體(ti) 易位、表現出多種染色體(ti) 畸變

• TOLEDO細胞對Epstein-Barr病毒（EBV）呈陰性、可用於(yu) 免疫學研究和3D細胞培養(yang) 、是研究非霍奇金淋巴瘤的重要模型係統

TOLEDO細胞參數表

TOLEDO人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞培養教程

TOLEDO細胞複蘇接種

• 從(cong) 液氮罐中取出TOLEDO細胞凍存管，迅速在37℃水浴中融化，並輕輕搖晃以加速融化過程。
  

• 將融化的TOLEDO細胞懸液轉移至含有培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻後離心（900 rpm，3-5分鍾），棄去上清。

• 加入預熱的培養(yang) 基重懸細胞，輕輕吹打以確保細胞均勻分散。

• 將細胞懸液均勻分配到T25培養(yang) 瓶中，推薦接種密度為(wei) 200-300萬(wan) /ml。
  

• 將培養(yang) 瓶放置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

TOLEDO細胞培養

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基。輕輕吸去舊培養(yang) 基，加入新鮮的完全培養(yang) 基。避免過度吸取細胞，以維持TOLEDO細胞的活性。
  

• 當TOLEDO細胞生長至80%匯合時，進行傳(chuan) 代。步驟如下：
  

• 吸去舊培養(yang) 基，用PBS洗滌細胞兩(liang) 次。

• 加入預熱的胰酶-EDTA溶液，37℃孵育2-3分鍾，使細胞脫落。

• 加入含血清的培養(yang) 基終止胰酶作用，輕輕吹打細胞以形成單細胞懸液。

• 將細胞懸液按1:2至1:4的比例接種到新的培養(yang) 瓶中，加入預熱的培養(yang) 基。

注意事項

• 細胞狀態：TOLEDO細胞在生長過程中可能會(hui) 有部分細胞附著於(yu) 瓶底。輕輕晃動或吹打細胞可幫助其脫落。避免使用胰酶過度消化，以免對細胞造成損傷(shang) 。

• 汙染防控：在操作過程中使用無菌技術，以防止汙染。定期檢查培養(yang) 箱和培養(yang) 基，保持實驗環境的潔淨。

• 細胞凍存：TOLEDO細胞生長良好時，可以進行凍存。使用92% FBS和8% DMSO的凍存液，按照凍存步驟進行操作。

培養基pH值的控製

• TOLEDO細胞係在pH值為(wei) 7.2-7.4的範圍內(nei) 生長最佳。培養(yang) 基中的碳酸氫鹽緩衝(chong) 係統有助於(yu) 維持pH值，但細胞代謝產(chan) 生的乳酸可能導致pH值降低。

• 定期檢測培養(yang) 基的pH值，適時補加碳酸氫鈉溶液，或使用HEPES緩衝(chong) 係統以維持pH穩定。