
DoHH2細胞係(人B細胞淋巴瘤細胞係)
- 來源:胸腔積液
- 細胞特征:懸浮細胞,淋巴細胞樣
- 培養(yang) 基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:DoHH2細胞係表達BCL2 mRNA,BCL2蛋白與(yu) 細胞凋亡的抑製有關(guan)
DOHH2細胞係來源於(yu) 一名患有難治性免疫母細胞型B細胞淋巴瘤的60歲男性患者,其原發病為(wei) 濾泡性中心母細胞型/中心細胞淋巴瘤,後期病情進展為(wei) 胸腔積液。DOHH2細胞係攜帶t(14;18)染色體(ti) 易位,形成IGH-BCL2融合基因,並能夠表達BCL2 mRNA。原始培養(yang) 物是EBV-和EBV+細胞的混合物,其中EBV-細胞被分離並克隆擴增。外顯子組和RNA序列數據可用(見參考18187和外顯子序列和RNA-Seq)。
DOHH2細胞係為(wei) 懸浮生長的淋巴母細胞樣細胞,DOHH2細胞係常用於(yu) 研究彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)的病理機製。特別適合研究由於(yu) IGH-BCL2易位導致的BCL2基因過表達,這與(yu) DLBCL的抗凋亡特性密切相關(guan) 。
DoHH2細胞係參數表
細胞名稱 | DoHH2細胞係(人B細胞淋巴瘤細胞係) |
別名 | DOHH2; DoHH-2; DOHH-2 |
年齡/性別 | 60歲/男性 |
組織來源 | 胸腔積液 |
疾病特征 | 難治性免疫母細胞型B細胞淋巴瘤 |
細胞類型 | 腫瘤細胞 |
形態學 | 淋巴母細胞樣 |
生物安全等級 | BSL-1 |
基因易位 | t(14;18)導致IGH-BCL2融合基因 |
基因表達 | 表達BCL2 mRNA |
EB病毒狀態 | 原始培養物為EBV陽性和陰性細胞混合,分離後獲得EBV陰性細胞 |
培養基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S |
生長條件 | 95%空氣 + 5% CO₂, 溫度37℃ |
推薦傳代比例 | 1:2至1:6 |
推薦換液頻率 | 每周2-3次 |
倍增時間 | ~40小時 |
凍存液 | 90% 完全培養基 + 10% DMSO |
凍存條件 | 液氮儲存 |
支原體檢測 | 陰性 |
保藏機構 | DSMZ; ACC-47 |
應用領域 | B細胞淋巴瘤的病理機製研究、藥物篩選等 |
培養教程
DoHH2人B細胞淋巴瘤細胞係培養教程
DoHH2細胞複蘇
從(cong) 液氮中取出DoHH2細胞凍存管,迅速在37℃水浴中解凍,期間輕輕搖動以加速解凍。
解凍完成後,將細胞懸液緩慢加入4 mL新鮮的完全培養(yang) 基中,並輕輕混勻。
以1000 RPM離心4分鍾,去除上清液,保留細胞沉澱。
用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸細胞,隨後將DoHH2細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中。
將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中,靜置過夜,以便細胞適應生長環境。
日常維護與傳代
換液頻率:每2-3天進行一次換液。方法為(wei) 輕輕吸去一部分舊培養(yang) 基,補充新鮮培養(yang) 基,確保DoHH2細胞始終處於(yu) 健康的生長環境中。
傳(chuan) 代操作:當DoHH2細胞密度達到80%-90%時,進行傳(chuan) 代操作。
將細胞培養(yang) 液輕輕吸出並離心沉澱細胞。
重懸DoHH2細胞於(yu) 新鮮培養(yang) 基中,按比例(1:2至1:6)分裝到新的培養(yang) 瓶中。
轉入培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。
DoHH2細胞凍存
凍存培養(yang) 基配方為(wei) 90%完全培養(yang) 基 + 10%二甲基亞(ya) 碸(DMSO)。
將DoHH2細胞懸液分裝至凍存管,逐步降低溫度至-80°C,最後轉移至液氮中長期保存。
按照前述複蘇步驟操作,將DoHH2細胞快速解凍並重新培養(yang) 。
注意事項
無菌操作:整個(ge) 培養(yang) 過程中需嚴(yan) 格遵守無菌技術,防止細胞汙染。操作時盡量使用無菌工具,定期檢查培養(yang) 環境及設備。
汙染監控:每天觀察DoHH2細胞形態和培養(yang) 基的澄清度。如發現培養(yang) 基渾濁或細胞形態異常,應及時采取措施處理。
健康監測:DoHH2細胞為(wei) 懸浮生長細胞,定期監測細胞生長狀態,避免細胞過度密集導致營養(yang) 耗盡。此外,注意檢查懸浮細胞的均勻性,確保細胞分布一致。
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STR鑒定及相關
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 11,12 |
D2S1338 | 22,24 |
D3S1358 | 15,17 |
D5S818 | 11,12 |
D7S820 | 11 |
D8S1179 | 13,16 |
D13S317 | 12,13 |
D16S539 | 11,14 |
D18S51 | 11,14 |
D19S433 | 14.2,15.2 |
D21S11 | 30 |
FGA | 21,27 |
Penta D | 9,12 |
Penta E | 12,16 |
TH01 | 9 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 14,19 |
參考文獻
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