HBL-1細胞（人彌漫大B淋巴瘤細胞）

HBL-1細胞係來源於(yu) 一名65歲的男性患者，患有艾滋病相關(guan) 的小非切割細胞淋巴瘤（AIDS-SNCCL），並伴有彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）。HBL-1細胞係是從(cong) 患者胸腔積液中分離並成功建立的，屬於(yu) EBV陰性的B細胞淋巴瘤細胞係，呈懸浮生長狀態，形態與(yu) 淋巴母細胞相似。HBL-1細胞在研究AIDS相關(guan) 非霍奇金淋巴瘤（AIDS-NHL）和DLBCL的生物學特征及潛在治療方法方麵具有重要價(jia) 值。

HBL-1細胞特性特征

• 表麵標記：HBL-1細胞表達表麵免疫球蛋白和B細胞限製性標記，顯示成熟B細胞的表型，同時存在與(yu) SNCCL相關(guan) 的典型表型特征。
  

• EB病毒感染：HBL-1細胞具有EB病毒的單克隆感染。

• 基因重排：HBL-1細胞顯示克隆免疫球蛋白基因重排。
  

• 遺傳(chuan) 損傷(shang) ：與(yu) c-myc癌基因激活和p53抑癌基因失活相關(guan) 的遺傳(chuan) 損傷(shang) ，與(yu) AIDS-SNCCL中發現的遺傳(chuan) 損傷(shang) 一致。

• 染色體(ti) 分析：HBL-1細胞顯示染色體(ti) 畸變，特別是14q+標記染色體(ti) 之間的易位（如14和16號染色體(ti) 之間的易位）。

• HBL-1細胞係不僅(jin) 為(wei) 研究AIDS相關(guan) 淋巴瘤提供了一個(ge) 重要的實驗模型，還可以作為(wei) HBL-2和HBL-3等克隆的比較模型。
  

HBL-1細胞參數表

HBL-1人彌漫大B淋巴瘤細胞培養教程

HBL-1細胞複蘇

• 解凍：將凍存的HBL-1細胞管從(cong) 液氮中取出，迅速放入37℃水浴中進行解凍，輕輕搖晃使HBL-1細胞凍存液均勻融化，但避免水浴口水進入凍存管。解凍時間控製在1-2分鍾。

• 混合培養(yang) 基：解凍後，迅速將HBL-1細胞懸液轉移至含有5 mL DMEM培養(yang) 基（含10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（PS））的離心管中，輕輕混勻。

• 離心：以1000 RPM（相對離心力約200g）離心5分鍾，棄去上清液。

• 重懸細胞：向細胞沉澱中加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打，使HBL-1細胞充分懸浮。

• 培養(yang) ：將HBL-1細胞懸液轉移至6 cm培養(yang) 皿或T25培養(yang) 瓶，補充至6-8 mL DMEM完全培養(yang) 基，置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。

HBL-1細胞狀態檢查與培養基更換

• 檢查細胞狀態：第二天觀察HBL-1細胞形態，檢查是否有大量懸浮或貼壁HBL-1細胞。

• 更換培養(yang) 基：若有較多漂浮細胞和碎片，可通過更換培養(yang) 基清除死HBL-1細胞及代謝廢物。保留一定比例的原培養(yang) 基，以保留較活躍的HBL-1細胞群體(ti) 。

HBL-1細胞傳代

• 當HBL-1細胞密度達到80%-90%時，應進行傳(chuan) 代操作。以下兩(liang) 種方法可供選擇：

• 方法一：全量換液

• 收集細胞：將培養(yang) 瓶中的HBL-1細胞培養(yang) 液全部吸出並轉移至離心管中。

• 離心：在1000 RPM下離心5分鍾，棄去上清液。

• 重懸細胞：加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打使HBL-1細胞懸浮。

• 分瓶：將HBL-1細胞懸液按1:2至1:4比例分配至新的培養(yang) 瓶中，加入8 mL培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

• 方法二：半量換液

• 棄去部分培養(yang) 基：從(cong) 原培養(yang) 瓶中棄去一半培養(yang) 基，保留剩餘(yu) 的HBL-1細胞懸液。

• 分瓶：將剩餘(yu) 的HBL-1細胞懸液按1:2至1:3的比例分配至新的培養(yang) 瓶中，補充新鮮培養(yang) 基至8 mL，總體(ti) 積充足後繼續培養(yang) 。

HBL-1細胞凍存

• 當HBL-1細胞狀態良好並達到適當密度時，應進行細胞凍存操作以便於(yu) 長期保存。

• 收集細胞：將培養(yang) 瓶中的HBL-1細胞連同培養(yang) 基一起轉移至離心管中，以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液。

• 清洗：用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液清洗一次，以去除殘留的培養(yang) 基和代謝物。

• 細胞計數：使用血球計數板或自動細胞計數儀(yi) 計算HBL-1細胞數，調整細胞濃度至5×10⁶至1×10⁷個(ge) 細胞/mL。

• 凍存液準備：製備90%胎牛血清和10% DMSO的凍存液，按1 mL的體(ti) 積加入每個(ge) 凍存管中，確保均勻混合HBL-1細胞。

• 凍存：將凍存管置於(yu) 程序降溫盒內(nei) ，放入-80℃冰箱中冷凍24小時後，移入液氮罐中進行長期保存。