
D283Med細胞係(人腦髓母細胞瘤細胞係)
- 來源:腦組織
- 細胞特征:半貼半懸,上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:生長培養(yang) 基:MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S
- 其他:基因表達:穀氨酰胺合成酶、神經元特異性烯醇化酶陽性,但不表達膠質纖維酸性蛋白和S100蛋白。
D283 Med細胞係由Friedman等人在1985年建立,源自一名6歲患有神經管細胞瘤且有腹腔轉移的白人男性小孩的腹水細胞。D283 Med細胞是一種上皮樣細胞係。
D283 Med細胞係特性
源自6歲白人男性小孩的神經管細胞瘤腹水細胞和腹膜轉移,用於(yu) 研究人腦髓母細胞瘤。
裸鼠實驗中可以形成連續移植的顱內(nei) 和皮下腫瘤。
具有特定的染色體(ti) 核型:45, XY, -7, -8, -17, -20, der(20)t(1;20)(q12;q13), 8q+, 17p+。
基因表達:穀氨酰胺合成酶、神經元特異性烯醇化酶陽性,但不表達膠質纖維酸性蛋白和S100蛋白。
表達SCLC(小細胞肺癌)的生化標誌物:神經元特異性烯醇化酶、肌酸激酶的腦同工酶、L-DOPA脫羧酶和蛙皮素樣免疫反應性
表達同工酶:AK-1, ES-D, G6PD, PGM1, PGM3。
D283 Med細胞係參數表
細胞名稱 | D283Med細胞係(人腦髓母細胞瘤細胞係) |
別稱 | D283 MED; D283-MED; D283_Med; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D-283; D283; Med 283; H283 |
來源 | 一名6歲患有神經管細胞瘤且有腹腔轉移的白人男性小孩的腹水細胞 |
細胞形態 | 上皮樣細胞 |
生長特性 | 懸浮細胞的多細胞聚集體,和一些貼壁細胞 |
倍增時間 | ~52小時 |
致瘤性 | 是,在裸鼠中形成可連續移植的顱內和皮下腫瘤 |
基因表達 | 穀氨酰胺合成酶陽性;神經元特異性烯醇化酶陽性;膠質纖維酸性蛋白陰性;S100蛋白陰性; 表達升高水平的SCLC四種生化標誌物(神經元特異性烯醇化酶;肌酸激酶的腦同工酶;L-DOPA脫羧酶;蛙皮素樣免疫反應性) |
同工酶 | AK-1, 1;ES-D, 1;G6PD, B;GLO-I, 2;Me-2, 0;PGM1, 1;PGM3, 1 |
細胞汙染 | HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性 |
細胞生長 | 細胞生長良好,形態正常 |
臨床數據 | D283-Med細胞係由Friedman等人於(yu) 1985年從(cong) 惡性腹水細胞和腹膜轉移中建立。 核型為(wei) 45,XY,-7,-8,-17,-20,der(20)t(1;20)(q12;q13),8q+,17p+。具有5.4%的較高倍體(ti) 頻率。 存在三條標記染色體(ti) :der(20)t(1;20)(q12;q13)、8q+和17p+。N7、N17和N20具有單個(ge) 副本。 單個(ge) X在結構上是正常的,並且通過熒光顯微鏡證實存在Y染色體(ti) 。 |
細胞生長特性 | 懸浮聚團生長,有少數貼壁細胞 |
保藏機構 | ATCC; HTB-185 |
用途 | 研究人腦髓母細胞瘤 |
培養教程
D283Med人腦髓母細胞瘤細胞係培養
傳代方法
收集細胞:
將培養(yang) 瓶中的懸浮細胞收集到離心管中。
用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,PBS潤洗後細胞會(hui) 脫落,PBS也要回收到離心管中。
消化細胞:
加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中(T25瓶1-2 mL,T75瓶2-3 mL),置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。
在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓並脫落後,輕敲培養(yang) 瓶並加入3-4 mL含10% FBS的培養(yang) 基來終止消化。
離心:
將收集到的懸浮細胞、PBS清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000 rpm離心5分鍾,棄去上清。
重懸:
加入1-2 mL培養(yang) 基重懸混勻,將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8 mL新完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力。
後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
凍存步驟
細胞收集和消化:
按照傳(chuan) 代過程收集和消化細胞。
使用血球計數板計數,決(jue) 定細胞的凍存密度,一般為(wei) 1×10^6~1×10^7個(ge) 活細胞/mL。
離心和重懸:
1000 rpm離心3-5分鍾,去掉上清。
用配製好的細胞凍存液重懸細胞,每1 mL凍存液含1×10^6~1×10^7個(ge) 活細胞,分配到凍存管中。
凍存和儲(chu) 存:
標注好名稱、代數、日期等信息。
將細胞置於(yu) 程序降溫盒中,在-80°C冰箱中過夜,然後轉入液氮容器中儲(chu) 存。
相關資料
STR鑒定及相關
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 9,12 |
D2S1338 | 17,23 |
D3S1358 | 15 |
D5S818 | 11 |
D7S820 | 10 |
D8S1179 | 12,13 |
D13S317 | 8,10 |
D16S539 | 11 |
D18S51 | 16,18 |
D19S433 | 13,14 |
D21S11 | 28,30.2 |
FGA | 20,23 |
Penta D | 9,13 |
Penta E | 7,10 |
TH01 | 7 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 16,18 |