小鼠原代腦微血管內(nei) 皮細胞

腦微血管內(nei) 皮細胞（BMVECs）是血腦屏障（BBB）的主要組成部分，負責限製可溶性物質和細胞從(cong) 血液進入大腦。

小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞（Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells, mBMVECs）是研究血腦屏障（BBB）和腦血管疾病的重要模型，屬於(yu) 內(nei) 皮細胞，位於(yu) 腦微血管的內(nei) 壁，形成一層單層細胞層。
小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞來源於(yu) 小鼠腦組織的微血管，主要通過機械切割和酶解等方法進行分離和純化。
小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞在調節物質和細胞跨越血腦屏障發揮關(guan) 鍵作用，保護腦組織的內(nei) 環境穩定。

小鼠腦微血管內皮細胞特性

• 緊密連接（Tight Junctions）：小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞通過緊密連接蛋白（如occludin、claudin-5和ZO-1）形成高選擇性的屏障，產(chan) 生高跨內(nei) 皮電阻（TEER），有效防止物質和離子通過細胞旁路徑滲透。

• 低胞飲水平（Low Transcytosis）：與(yu) 其他類型的內(nei) 皮細胞不同，小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞的液相胞飲水平較低，進一步增強了其屏障功能，減少了大分子物質通過細胞穿過的可能性。

• 缺乏窗孔結構（Lack of Fenestrations）：小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞缺乏典型的內(nei) 皮細胞窗孔結構，有助於(yu) 維持血腦屏障的完整性，阻止血液中的大分子和細胞自由進入腦組織。

• 兩(liang) 極分化（Polarity）：具有不對稱定位的酶和轉運蛋白，表現出兩(liang) 極分化現象。

• 細胞粘附分子（Cell Adhesion Molecules）：小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞表麵表達多種細胞粘附分子（如ICAM-1、VCAM-1），這些分子在調控白細胞跨越血腦屏障和炎症反應中有重要作用。

• 生物活性物質分泌（Secretion of Bioactive Substances）：小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞分泌多種生物活性物質，包括一氧化氮（NO）、內(nei) 皮素（ET）和前列腺素（PGs），這些物質在調節血管張力、血流動力學和抗血栓形成中發揮重要作用。

小鼠腦微血管內皮細胞參數表

小鼠腦微血管內皮細胞培養

培養基和培養條件：

• 小鼠腦微血管內(nei) 皮細胞完全培養(yang) 基

• 傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2，每2-3天換液一次

培養步驟：

取材處理：

• 使用C57小鼠，頸椎脫臼後處死。

• 將小鼠浸泡於(yu) 75%乙醇中消毒3-5分鍾，然後取出置於(yu) 玻璃培養(yang) 皿中。

• 打開顱腔，去除小腦和間腦，保留大腦皮質。

大腦處理：

• 將大腦半球在幹濾紙上滾動以吸除軟腦膜及腦膜大血管。

• 將大腦置於(yu) 含冷D-Hanks'液的玻璃培養(yang) 皿中，用細解剖鑷去除大腦白質、殘餘(yu) 大血管和軟腦膜。

消化和純化：

• 用D-Hanks'液漂洗3次後，加入1 ml DMEM培養(yang) 液，將大腦剪碎成1 mm³大小。

• 加入0.1%Ⅱ型膠原酶（含30 U/ml DNase I，1 ml/大腦）混勻，37℃水浴消化1.5小時。

• 離心去除上清液，加入20% BSA懸浮混勻後再次離心，去除中上層神經組織及大血管，保留底部沉澱。

細胞處理：

• 加入3 ml 2.5%胰酶消化液消化20分鍾，加入含血清培養(yang) 基終止消化，離心去除上清液。

• 加入2 ml DMEM培養(yang) 液懸浮後，鋪於(yu) 離心形成連續梯度的12 ml 50% Percoll，離心分離出微血管段。

• 使用DMEM漂洗兩(liang) 次，去除上清液。

培養(yang) ：

• 將分離純化的微血管段加入DMEM完全培養(yang) 液（含20% FBS），接種於(yu) 塗布基質的35 mm一次性塑料培養(yang) 皿。

• 置於(yu) 37℃，5% CO₂培養(yang) 箱內(nei) 靜置培養(yang) 。

• 12-24小時後換液，並加入1 ng/ml堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），隔天換液。