大鼠脊髓神經元細胞（kaiyun网站安全）

大鼠脊髓神經元細胞源自中樞神經係統的延伸部分，即脊髓組織。

大鼠脊髓神經元細胞具有高度的分化程度，無法進行分裂增殖，在培養(yang) 過程中要求較高。神經幹細胞作為(wei) 一種特殊類型的細胞，具有自我維持和多種分化潛能，對損傷(shang) 和疾病有較強的反應能力，是神經係統損傷(shang) 修複和再生研究的熱點。

大鼠脊髓神經元細胞特性

• 大鼠脊髓神經元細胞分離自脊髓組織，是源自腦的中樞神經係統延伸部分。

• 脊髓主要功能是傳(chuan) 送腦與(yu) 外周之間的神經信息，是許多簡單反射的中樞。

• 脊髓的結構包括灰質區和白質區，其中灰質區主要由神經細胞構成。

• 脊髓神經元細胞是高度分化的終末細胞，不能分裂增殖，培養(yang) 要求高。

• 神經幹細胞具有自我維持和多種分化潛能，對損傷(shang) 和疾病具有反應能力，是神經係統損傷(shang) 修複和再生研究的熱點。

• 大鼠原代脊髓神經元細胞是用於(yu) 神經科學研究和藥物篩選的重要工具。

大鼠脊髓神經元細胞參數表

大鼠脊髓神經元細胞分離及培養操作步驟

1. 培養皿的包被

• 將蓋玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小，洗潔精浸洗、烘幹。

• 經 5%鹽酸浸泡30min，自來水衝(chong) 洗20min，三蒸水衝(chong) 洗，浸泡過夜並烘幹；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精燈烤幹，放入 24 孔細胞培養(yang) 板。

• 用 0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養(yang) 皿和小玻片，37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。吸棄 L-多聚賴氨酸溶液，滅菌去離子水漂洗培養(yang) 孔及小玻片，晾幹備用。

2. 大鼠脊髓神經元細胞的分離及培養

• 用 75%酒精消毒新鮮 24h 內(nei) 的健康 SD 大鼠，在無菌條件下斷頭，分離並切取脊髓，置於(yu) 盛冷的pH7.2、無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

• 無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。

• 用虹膜剪將組織剪切成 1mm3左右的組織塊，用 0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 10min，期間振搖 2~3次。

• 巴斯德吸管輕輕吹打 20次，靜置 5min，將細胞上清移入新的無菌離心管，加入完全接種液終止消化。剩餘(yu) 組織按照上述步驟繼續消化，重複2-3次，製成細胞懸液。

• 將新的離心管中細胞懸液，離心（1000r/min，10 min，4℃），棄去上清液。加入完全培養(yang) 液重懸，200 目不鏽鋼網過濾。

• 將濾液進行台盼藍拒染試驗，血細胞計數板鏡下計數。以 8.0 × 104 至 1.0 × 105/mL 的密度將細胞以 400µl/孔接種到預先用 L-多聚賴氨酸包被的 24 孔培養(yang) 板。

• 置於(yu) 37℃、5% CO2 培養(yang) 箱培養(yang) 4～6h，全量更換為(wei) 無血清培養(yang) 液。

• 體(ti) 外培養(yang) 第 3天，加入 Ara-C 工作液，以抑製非神經細胞過度增殖，作用 24 h 後吸出。

• 此後每 3d 半量換液1次，體(ti) 外培養(yang) 第 7～21天的細胞用於(yu) 實驗。

無菌操作注意事項

• 細胞培養(yang) 過程中保持操作區域的無菌清潔，包括使用紫外線和臭氧消毒設備、更換專(zhuan) 用拖鞋、穿戴一次性橡膠手套、實驗服、口罩和帽子等。