Daoy細胞係（人髓母細胞瘤細胞）

Daoy人髓母細胞瘤細胞是一種多邊形細胞，從(cong) 一名患有結締組織增生性小腦髓母細胞瘤的4歲白人男性的小腦中分離出來，活檢腫瘤取自後顱窩。用於(yu) 神經科學研究。

Daoy細胞不具備神經元和神經膠質分化的特征。用二丁基環腺苷酸（cAMP）處理細胞不會(hui) 誘導通過S100（S-100）蛋白和膠質纖維酸性蛋白（GFAP）染色測量的那些特征的表達。

Daoy細胞係是模式數在93和99之間的超四倍體(ti) 人類細胞係，具有較高倍性的細胞的頻率為(wei) 2.0%。由於(yu) 幹細胞染色體(ti) 數量很高，對多倍體(ti) 的估計是暫時的。所有細胞共有13條或更多的標記染色體(ti) ，其中許多細胞有兩(liang) 到四個(ge) 拷貝。標記物包括：t（1q5q）、t（13q；？）、15p+、7q+、der（9）t（3；9）（p21；q34）和其他8個(ge) 。
在大多數細胞中，15p+有三個(ge) 拷貝，der（9）有四個(ge) 拷貝。一些細胞具有del（1）（p11）。正常的N12、N14、N15和N19傾(qing) 向於(yu) 每個(ge) 細胞具有四個(ge) 或更多個(ge) 拷貝。大多數細胞中有兩(liang) 條正常的X染色體(ti) ，但沒有檢測到正常的Y染色體(ti) 。

Daoy細胞係特性

• 來源：從(cong) 一名患有結締組織增生性小腦髓母細胞瘤的4歲白人男性小腦中分離出來，活檢腫瘤取自後顱窩。

• 建係：由西澳大利亞(ya) 皇家珀斯醫院的P.F Jacobsen於(yu) 1985年建立。

• Daoy細胞是多邊形細胞，是一種超四倍體(ti) 人類細胞係，染色體(ti) 數目不穩定。

• 致瘤性：在裸鼠體(ti) 內(nei) 形成可連續移植的顱內(nei) 和皮下腫瘤。

• 細胞標記染色體(ti) ：包括t(1q5q)、t(13q;?)、15p+、7q+、der(9)t(3;9)(p21;q34)等。

• 分化特性：原始腫瘤具有神經元和神經膠質分化特征，但在細胞係中未保留。

• 響應cAMP處理：不會(hui) 誘導表達神經元和膠質細胞標記物S100和GFAP。

• 同工酶：包括AK-1、ES-D、G6PD、GLO-I、Me-2、PGM1、PGM3。

Daoy細胞係參數表

Daoy細胞係培養

細胞密度達80%-90%時傳代培養

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗Daoy細胞1-2次。

• 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察Daoy細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

• 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

• 收到Daoy細胞後首次傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或瓶中，建議凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

凍存步驟

• Daoy細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。

• 4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸Daoy細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 5%，細胞密度不低於(yu) 1x10^6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮罐儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。