H4細胞（人腦神經膠質瘤細胞）

H4人腦神經膠質瘤細胞係是1973年從(cong) 一名37歲患有神經膠質瘤的白人男性大腦中分離的上皮細胞係。

H4細胞具有超三倍體(ti) 特性，模式染色體(ti) 數為(wei) 73，範圍=63到78，占26%的細胞中出現，但也有24%的細胞展示出75條染色體(ti) 。少數細胞（0.4%）展示出更高的染色體(ti) 倍性。
在所有檢查的中期細胞中，至少有16條標記染色體(ti) 是共同的，包括成對的del(2)(p2209)和del(9)(p22)，以及單條der(14)t(1;14)(p22;q22)、del(3)(p2501)、del(5)(p13)、del(7)(q11)等。N7和N21在每個(ge) 細胞中出現四個(ge) 或更多拷貝。大多數細胞含有兩(liang) 條X染色體(ti) 和兩(liang) 條Y染色體(ti) 。

H4細胞特性特征

• H4細胞具有修複MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亞(ya) 硝基胍）損傷(shang) 5型腺病毒的能力
  

• 同工酶表達：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，0；PGM1，1-2；PGM3，1
  

• H4細胞致瘤特性已被屏蔽，接種動物通常不產(chan) 生腫瘤結節
  

• 在免疫抑製小鼠中不致瘤

• H4細胞適合作為(wei) 轉染宿主、可用於(yu) 神經科學研究

H4細胞參數表

H4人腦神經膠質瘤細胞培養教程

H4細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的H4細胞，迅速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃使其快速融化。

• 解凍後立即將H4細胞懸液轉移至含有10 ml預熱的培養(yang) 基的離心管中，1000 rpm離心5分鍾。

• 吸去上清，加入10 ml新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打混勻。

• 將H4細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 。

H4細胞培養

• 換液：每2-3天換液一次，即使培養(yang) 基沒有變黃。換液時輕輕側(ce) 過培養(yang) 瓶，不要使H4細胞飄起來，用巴氏吸管輕輕吸取部分上清棄去，補加等體(ti) 積的新鮮培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

• 傳(chuan) 代比例：1:2或1:4；傳(chuan) 代周期：2-3天

• 吸去舊培養(yang) 基，加入適量的PBS洗滌H4細胞。

• 吸去PBS，加入適量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-3分鍾，觀察H4細胞是否脫落。

• 輕輕敲打培養(yang) 瓶，使H4細胞完全脫落，加入新鮮培養(yang) 基終止消化。

• 將H4細胞懸液轉移至離心管中，1000 rpm離心5分鍾。

• 吸去上清，加入新鮮培養(yang) 基重懸H4細胞，按比例分裝至新的培養(yang) 瓶中。

H4細胞凍存

• 凍存液配方：基礎培養(yang) 基 + 5% DMSO + 10% FBS

• 收集對數生長期的H4細胞，1000 rpm離心5分鍾。

• 吸去上清，加入凍存液重懸H4細胞，細胞密度為(wei) 1×10⁶ cells/ml。

• 將H4細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 ml。

• 逐步降溫：先置於(yu) 4℃ 30分鍾，然後轉移至-80℃ 4小時，最後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• H4細胞對氧氣、密度和養(yang) 分非常敏感，需保持勤換液和傳(chuan) 代，避免H4細胞過度密集。

• 培養(yang) 基盡量現配，配好的培養(yang) 基最好在兩(liang) 周內(nei) 用完，因為(wei) 葉酸不穩定易分解。

• 換液時，避免吹打過度，H4細胞對離心和吹打比較敏感，離心和反複吹打會(hui) 影響H4細胞狀態。

常見問題及解決方法

• H4細胞不貼壁：檢查培養(yang) 基成分和培養(yang) 條件，確保胰蛋白酶消化時間適當。

• H4細胞生長緩慢：檢查CO2濃度、培養(yang) 溫度和培養(yang) 基是否新鮮。

• H4細胞汙染：定期進行無菌檢測，確保操作環境和耗材的無菌性。