huh-7.5.1細胞（人肝癌細胞）

Huh-7.5.1細胞係是從(cong) 一名57歲男性肝細胞癌患者的肝髒中獲得的人肝癌細胞。huh-7.5.1細胞係由Huh-7細胞的亞(ya) 克隆衍生而來，並經過基因改造，使其能夠更有效地在體(ti) 外支持丙型肝炎病毒（HCV）的複製。廣泛用於(yu) 其他病毒（如SARS-CoV-2）與(yu) 宿主細胞相互作用的研究。

huh-7.5.1細胞特性特征

• RIG-I基因突變：huh-7.5.1細胞的RIG-I基因發生了突變，導致其對幹擾素（IFN-β）的反應能力降低，從(cong) 而使HCV可以在細胞中更順利地複製和傳(chuan) 播。
  

• 抗原表達：huh-7.5.1細胞係可能表達多種肝髒相關(guan) 的抗原，如甲胎蛋白（AFP），這與(yu) 肝癌的特征相關(guan) 。
  

• Huh-7.5.1細胞在感染HCV後，會(hui) 表現出特定的病毒相關(guan) 基因表達，這對於(yu) 研究病毒生命周期和抗病毒藥物開發至關(guan) 重要
  

huh-7.5.1細胞參數表

huh-7.5.1人肝癌細胞培養教程

Huh7.5.1細胞複蘇

• 提前將水浴鍋預熱至37℃。
  

• 使用75%酒精消毒操作區域和工具，包括離心管、移液器、培養(yang) 瓶等。

• 超淨工作台需用紫外線照射至少30分鍾以確保無菌操作環境。

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的Huh7.5.1細胞管，迅速放入37℃的水浴鍋中，輕輕搖動至完全融化（約1-2分鍾）。
  

• 立即用酒精棉球擦拭管壁，然後轉移到超淨工作台內(nei) 。

• 將解凍後的Huh7.5.1細胞懸液轉移到15 mL離心管，300 g離心3分鍾。
  

• 棄去上清，加入預溫的完全培養(yang) 基（DMEM+10% FBS）重懸細胞，調整細胞濃度至約5×10^5 cells/mL。

• 將Huh7.5.1細胞懸液分裝入培養(yang) 瓶中，放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱內(nei) 。
  

• 培養(yang) 2-4小時後檢查細胞狀態，必要時更換培養(yang) 基。

Huh7.5.1細胞傳代

• 當Huh7.5.1細胞達到80%-90%的匯合度時進行傳(chuan) 代。
  

• 準備0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA溶液用於(yu) 細胞消化。

• 棄去舊培養(yang) 基，使用不含鈣、鎂的PBS衝(chong) 洗Huh7.5.1細胞1-2次。
  

• 加入1 mL消化液覆蓋細胞層，放置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化2-5分鍾，觀察Huh7.5.1細胞是否開始脫落。

• 輕輕吹打細胞，如果Huh7.5.1細胞大部分已脫離，立即終止消化。

• 加入2-3 mL完全培養(yang) 基終止消化，將細胞懸液轉移至無菌離心管中，1000 g離心5分鍾。
  

• 棄去上清，加入新鮮培養(yang) 基重懸Huh7.5.1細胞。

• 將重懸後的Huh7.5.1細胞按1:2的比例分裝至新的培養(yang) 瓶中，加入適量完全培養(yang) 基，繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) 。

Huh7.5.1細胞凍存

• 使用90%完全培養(yang) 基與(yu) 10%DMSO混合製備凍存液。
  

• 將收集到的Huh7.5.1細胞離心，去除上清後加入凍存液製成細胞懸液。
  

• 按每管1×10^6 cells的濃度將Huh7.5.1細胞懸液分裝到凍存管中。

• 將凍存管先放置於(yu) 4℃預冷30分鍾，再放置於(yu) -20℃ 1小時，隨後置於(yu) -80℃冰箱過夜。
  

• 第二天將凍存管轉移至液氮罐中長期保存。

• 對每個(ge) Huh7.5.1細胞凍存管進行編號，並記錄詳細信息，包括細胞數量、凍存日期等，以便後續查找和複蘇。
  

注意事項

• 操作過程中嚴(yan) 格保持無菌操作，避免交叉汙染。

• 定期檢查培養(yang) 箱的溫度、CO₂濃度等條件，確保Huh7.5.1細胞生長環境穩定。

• 複蘇後的Huh7.5.1細胞需密切觀察貼壁率和活力，若95%以上細胞貼壁且活性良好，表明複蘇成功。