92-1細胞（人眼葡萄膜黑色素瘤細胞係）

92-1細胞係是一種來源於(yu) 人類葡萄膜黑色素瘤的上皮樣腫瘤細胞係，最初建立自一位76歲女性患者右眼眶的原發性葡萄膜黑色素瘤組織。92-1細胞係是在歐洲委員會(hui) 第五框架計劃（合同編號QLRI-CT-2001-01325）資助的ESTDAB項目（European Searchable Tumour Cell Line Database）中收集的170餘(yu) 種特征性黑色素瘤細胞係之一。ESTDAB數據庫提供了包括HLA基因型及其表麵表達、腫瘤相關(guan) 抗原的表達譜、抗原加工機製、細胞因子/趨化因子產(chan) 生與(yu) 響應特征、以及粘附分子與(yu) 凋亡調控蛋白表達等多項免疫學與(yu) 腫瘤生物學相關(guan) 參數，有助於(yu) 研究者在免疫學、腫瘤轉移、化療敏感性及基因表達等領域開展係統研究。

92-1細胞係經STR分型驗證其人源性及係別特異性，具備明確的分子身份識別信息。目前，92-1細胞被廣泛應用於(yu) 解析葡萄膜黑色素瘤的分子通路、信號轉導及免疫相關(guan) 機製，同時也是抗腫瘤候選藥物篩選、基因功能研究及異種移植（CDX）模型構建的重要工具。

92-1細胞（人眼葡萄膜黑色素瘤細胞係）特性特征

• 92-1細胞表現出上皮樣形態，貼壁依賴性強，具有中等增殖速度，倍增時間約為(wei) 38至58小時，適合在常規體(ti) 外培養(yang) 條件下穩定傳(chuan) 代。

• 92-1細胞具有特定的HLA基因型和表麵HLA分子表達，適合免疫學和免疫遺傳(chuan) 學研究。

• 92-1細胞表達多種腫瘤相關(guan) 抗原，有助於(yu) 研究腫瘤免疫逃逸機製。

• 92-1細胞具備抗原處理和呈遞功能，支持免疫相關(guan) 實驗。

• 92-1細胞能夠產(chan) 生並響應多種細胞因子和趨化因子，反映腫瘤微環境的複雜性。

• 92-1細胞表達與(yu) 細胞凋亡相關(guan) 的調節分子，適合研究腫瘤細胞的生存機製。

• 92-1細胞為(wei) GFAP（膠質纖維酸性蛋白）陽性，顯示部分小神經膠質細胞特征，但未檢測到其他神經元或膠質細胞標記。

• 92-1細胞表達調控細胞凋亡的相關(guan) 分子及細胞粘附分子，涉及腫瘤細胞的生存、侵襲和轉移能力。

• 92-1細胞保留葡萄膜黑色素瘤的關(guan) 鍵基因表達特征，適合腫瘤生物學和信號通路研究。

• 相關(guan) 研究顯示黑色素瘤細胞存在多種轉錄狀態，92-1細胞可能體(ti) 現melanocytic與(yu) intermediate狀態的部分特征，涉及轉錄因子SOX6、NFATC2、EGR3等。

• TBX2等轉錄因子在葡萄膜黑色素瘤的增殖、侵襲和免疫逃逸中發揮重要作用，92-1細胞可用於(yu) 相關(guan) 機製研究

• 經過STR（短串聯重複序列）鑒定，確認92-1細胞的人源性和細胞係特異性，保證細胞係的身份和穩定性。

• 92-1細胞是葡萄膜黑色素瘤研究的重要體(ti) 外模型，成為(wei) 眼部惡性腫瘤基礎研究及轉化醫學研究中的常用模型係統之一。

• 基因表達：保留葡萄膜黑色素瘤的關(guan) 鍵基因表達特征，適合腫瘤生物學、基因功能和信號通路研究

92-1細胞（人眼葡萄膜黑色素瘤細胞係）參數表

92-1人眼葡萄膜黑色素瘤細胞係培養教程

92-1細胞的複蘇步驟

• 水浴快速解凍：預熱37℃水浴鍋。

• 取出凍存的92-1細胞凍存管，迅速置於(yu) 水浴中解凍，過程中持續輕輕搖晃，控製解凍時間在1-2分鍾內(nei) ，避免溫度過高損傷(shang) 細胞。

• 去除凍存保護劑：將解凍後的92-1細胞懸液轉移至離心管，加入5 ml預熱完全培養(yang) 基（RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 青鏈黴素-鏈黴素）。1000 rpm離心5分鍾，輕柔棄去上清液，保留細胞沉澱。

• 細胞複懸與(yu) 接種：輕輕重懸92-1細胞於(yu) 新鮮培養(yang) 基中，接種於(yu) T25培養(yang) 瓶中。置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，首次培養(yang) 24小時後更換培養(yang) 基，以去除死細胞與(yu) 殘餘(yu) DMSO。

92-1細胞的傳代方法

• 觀察細胞融合度：當92-1細胞生長至瓶底麵積的80%左右時，應及時傳(chuan) 代，避免過度融合。

• 消化操作：棄去培養(yang) 液，用PBS洗滌一次。加入0.25%胰蛋白酶（1 ml/T25瓶），在顯微鏡下觀察細胞變圓並開始脫落，一般需1-3分鍾。

• 終止反應與(yu) 離心：加入等體(ti) 積完全培養(yang) 基終止胰酶消化反應。收集細胞懸液，1000 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 細胞接種：用新鮮完全培養(yang) 基重懸92-1細胞，按1:2比例接種至新瓶中。將培養(yang) 瓶放回培養(yang) 箱，常規每2-3天更換培養(yang) 基一次。

92-1細胞的凍存步驟

• 選取處於(yu) 對數生長期、生長狀態良好的92-1細胞進行凍存。按照傳(chuan) 代流程消化並收集細胞。
  

• 使用台盼藍排染法進行細胞計數，調整至5×10⁵至1×10⁷個(ge) 細胞/ml。
  

• 凍存液常用配方為(wei) 90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO。亦可選用無血清商用凍存液。
  

• 將92-1細胞懸液與(yu) 凍存液輕柔混合，避免氣泡產(chan) 生。

• 每支凍存管裝入1 ml細胞懸液，貼上清晰標簽。
  

• 放入程序降溫盒中，4℃預冷後置於(yu) -80℃過夜，使溫度降速約1℃/min。

• 次日將92-1細胞凍存管移入液氮罐中長期保存（-196℃），以維持細胞活力。

注意事項

• 所有關(guan) 於(yu) 92-1細胞的操作均需在無菌條件下進行，建議在Ⅱ級生物安全櫃中完成。

• 胰酶消化時間不宜過長，以免影響92-1細胞黏附能力與(yu) 活力。

• 凍存與(yu) 複蘇時應盡量避免反複凍融，避免造成細胞損傷(shang) 。

• 定期檢測細胞狀態及汙染（如支原體(ti) ）是保障實驗質量的必要步驟。