
A549肺癌細胞(人非小細胞肺癌細胞)
- 來源:A549人非小細胞肺癌細胞是從(cong) 一名58歲患有癌症的白人男性的肺中分離出的上皮細胞。
- 細胞特征:A549細胞在形態上呈上皮細胞樣,具有貼壁生長的特性,在體(ti) 外培養(yang) 時通常以單層細胞形式附著在培養(yang) 瓶上。
- 培養(yang) 基:生長培養(yang) 基:Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S
- 其他:A549細胞能夠利用胞苷二磷酸膽堿途徑合成具有高百分比去飽和脂肪酸的卵磷脂。
A549細胞係是一種常用的人類非小細胞肺癌細胞係,由D.J. Giard等人於(yu) 1972年通過一個(ge) 58歲的白人男性的肺癌組織建立。
A549細胞源自肺腺癌組織的外植體(ti) 腫瘤轉移,並在體(ti) 外培養(yang) 得到,具有上皮細胞的形態特征,在體(ti) 外培養(yang) 時通常以單層細胞形式附著在培養(yang) 瓶上生長。
A549細胞係常用於(yu) ISO 17025認證實驗室的測試和校準,以分析性能、驗證或比較測試方法,並在分析驗證或實施過程中建立靈敏度、線性和特異性。
這種亞(ya) 三倍體(ti) 人類細胞係的染色體(ti) 數為(wei) 66,存在於(yu) 24%的細胞中。染色體(ti) 計數為(wei) 64的細胞占22%,而染色體(ti) 數為(wei) 65和67的細胞也以相對較高的頻率出現。A549細胞中,大多數細胞有兩(liang) 條X染色體(ti) 和兩(liang) 條Y染色體(ti) ,但有40%的細胞失去了一條或兩(liang) 條Y染色體(ti) 。此外,有6個(ge) 標記物以單拷貝形式存在,包括der(6)t(1;6)(q11;q27)?del(6)、del(11)(q21)、del(2)(q11)、M4和M5。染色體(ti) N2和N6每個(ge) 細胞具有單個(ge) 拷貝,而N12和N17通常具有4個(ge) 拷貝。
A549細胞能夠利用胞苷二磷酸膽堿途徑合成具有高百分比去飽和脂肪酸的卵磷脂。在形態上呈上皮細胞樣,具有貼壁生長的特性,在體(ti) 外培養(yang) 時通常以單層細胞形式附著在培養(yang) 瓶上。這些細胞含有高度不飽和的脂肪酸,這對細胞膜磷脂的維持至關(guan) 重要。此外,A549細胞在營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基中生長迅速,具有較快的倍增時間約為(wei) 22小時。
A549細胞參數表
細胞係名稱 | A549人非小細胞肺癌細胞 |
細胞別稱 | a-549; |
細胞起源 | 1972年,由D.J. Giard等人從一個58歲的白人男性的肺癌組織建立 |
細胞類型 | 人類非小細胞肺癌細胞係 |
細胞形態 | 上皮細胞樣,在體外培養時以單層細胞形式附著在培養瓶上 |
細胞認證 | PCR、STR分型和細胞形態學鑒定 |
細胞存活狀態 | 培養基中保持較高的存活率 |
染色體數 | 66 |
染色體異常 | - 大多數細胞具有兩(liang) 條X染色體(ti) 和兩(liang) 條Y染色體(ti) ; - 約40%的細胞失去一條或兩(liang) 條Y染色體(ti) ; - 存在染色體(ti) 數為(wei) 64、65和67的細胞 |
標記物 | der(6)t(1;6)(q11;q27)、del(6)、del(11)(q21)、del(2)(q11)、M4和M5 |
卵磷脂合成 | 利用胞苷二磷酸膽堿途徑合成高百分比去飽和脂肪酸的卵磷脂 |
生長特性 | 貼壁生長 ;在營養豐富的培養基中生長迅速; 倍增時間約為22小時 |
主要應用 | 藥物篩選、機製研究、靶向治療、免疫治療、新型藥物研發 |
培養基名稱 | RPMI-1640培養基 |
培養基配方 | 含有緩衝劑、氨基酸、維生素、糖和鹽類等 |
培養基補充物 | 細胞生長因子(EGF);堿性纖維連接蛋白(FN) |
補充物 | 胰蛋白酶/EDTA用於細胞解離;青黴素/鏈黴素用於抗菌 |
培養基 | DMEM/F12(Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12)混合培養基,含有10% 胎牛血清(FBS)和1% 抗生素/抗菌素混合物(如青黴素/鏈黴素) |
培養條件 | CO2濃度:5%,溫度:37°C,器具:細胞培養箱,密度:80-90% |
凍存條件 | 凍存液:10% DMSO和90% FBS,溫度:-80°C或液氮中冷凍 |
傳代條件 | 方法:胰酶/EDTA消化法或機械剝離法,比例:1:2至1:4,時間:3-4天 |
細胞檢測與鑒定方法 | PCR、STR分型和細胞形態學鑒定 |
其他 | 轉染效率較高;對於不同藥物的反應存在差異性 |
應用及研究進展:A549細胞被廣泛應用於肺癌相關研究:
藥物篩選: A549細胞被用於(yu) 藥物篩選,是開發新型肺癌治療藥物的重要模型之一。通過對A549細胞體(ti) 外藥物敏感性的研究,可以為(wei) 肺癌的個(ge) 體(ti) 化治療提供重要參考。
機製研究: 通過研究A549細胞的發生、發展和轉移機製,可以深入了解非小細胞肺癌的發病過程及分子調控機製,為(wei) 肺癌治療的研究提供理論基礎。
靶向治療: A549細胞的研究有助於(yu) 發現針對肺癌特定靶點的治療方法。例如,A549細胞被廣泛應用於(yu) EGFR靶向治療的研究中。
免疫治療: A549作為(wei) 非小細胞肺癌的典型細胞模型,被廣泛應用於(yu) 免疫治療的研究中。針對A549細胞的PD-L1抗體(ti) 治療已在許多臨(lin) 床試驗中取得積極結果。
新型藥物研發: 針對A549細胞的藥物研究不斷取得新進展,例如通過人工合成大分子化合物來治療肺癌,並針對A549細胞進行驗證,證實了藥物的作用機製並展現出良好的治療效果。
A549細胞裸鼠驗證數據
Balb/c裸鼠的腫瘤發生分析(n=4)
M-NSG小鼠(n=10)的腫瘤發生分析。a通過時間測量腫瘤體(ti) 積。b同時檢查體(ti) 重。
A549異種移植物模型在hPBMC(M-NSG)小鼠中的腫瘤生長曲線。(n=6)
A549異種移植物模型在hPBMC(M-NSG)小鼠中的體(ti) 重變化。(n=6)
培養教程
準備工作:
收到A549細胞後,檢查A549細胞培養(yang) 瓶完好性和培養(yang) 液狀態。
使用75%酒精消毒瓶壁,並將A549細胞培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中預熱2-4小時。
複蘇細胞(T25瓶):
將A549細胞培養(yang) 瓶從(cong) 培養(yang) 箱取出,觀察A549細胞狀態。
采集A549細胞照片(10x, 20x)及培養(yang) 瓶外觀照片。
在37℃水浴中快速解凍A549細胞凍存管中的細胞,加入培養(yang) 基並混合均勻。
離心A549細胞懸液,棄去上清液,補充適量培養(yang) 基。
將A549細胞懸液加入含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中,置於(yu) 培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
傳代細胞:
當A549細胞密度達到80%-90%時,進行A549細胞傳(chuan) 代。
使用胰酶/EDTA消化法或機械剝離法進行傳(chuan) 代。
將傳(chuan) 代後的A549細胞按1:2至1:4的比例分裝到新的培養(yang) 皿中。
凍存細胞(凍存管):
收集A549細胞及培養(yang) 液,裝入無菌離心管中,離心收集A549細胞懸液。
加入含10% DMSO的凍存液,混合均勻後裝入凍存管。
將凍存管放入-80°C或液氮中冷凍保存。
常見問題與注意事項:
每2-3天更換一次培養(yang) 基,A549細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。
A549細胞凍存時,細胞密度為(wei) 5×10^6~1×10^7/mL,使用含10% DMSO的凍存液。
離心速率約為(wei) 1000 rpm,離心時間5-8分鍾。
使用與(yu) 原先相同的培養(yang) 基和血清種類,以保持一致性。
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STR鑒定及相關
STR點位信息
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 10,12 |
D1S1656 | 17,18.3 |
D2S441 | 10,13 |
D2S1338 | 24 |
D3S1358 | 16 |
D5S818 | 11 |
D7S820 | 8,11 |
D8S1179 | 13,14 |
D10S1248 | 13,16 |
D12S391 | 18 |
D13S317 | 11 |
D16S539 | 11,12 |
D18S51 | 14,17 |
D19S433 | 13 |
D21S11 | 29 |
D22S1045 | 15 |
DYS391 | 10 |
FGA | 23 |
Penta D | 9 |
Penta E | 7,11 |
TH01 | 8,9.3 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 14 |
參考文獻
- 現代食品科技 > 2017年4期
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