NCI-H146細胞（人小細胞肺癌細胞）

NCI-H146細胞是來源於(yu) 59歲白人男性小細胞肺癌患者骨髓轉移灶，呈上皮樣。NCI-H146細胞係最早由A.F. Gazdar等人於(yu) 1979年建立，經過分析發現其具有近三倍體(ti) 特性，主要染色體(ti) 數為(wei) 68，部分細胞染色體(ti) 數目在66至71之間波動。常見的結構異常包括der(1)t(1;13)(p32;q12)、del(3)(p21/22)、成對的der(7)t(7;?)(p22;?)以及t(13q16q)等，但未發現HSR或DM。X染色體(ti) 正常配對，而Y染色體(ti) 未被檢測到。
NCI-H146細胞係以懸浮生長為(wei) 主，易形成細胞聚團，具有快速增殖特性，非常適合用於(yu) 藥物篩選和癌症相關(guan) 研究。
NCI-H146細胞係在小細胞肺癌和癌症免疫學領域應用廣泛，尤其是在與(yu) 骨髓轉移相關(guan) 的研究中發揮了重要作用。其上皮樣細胞形態和懸浮生長特性使其成為(wei) 研究小細胞肺癌生物學及開發相關(guan) 治療藥物的重要工具。

NCI-H146人小細胞肺癌細胞特性特征

• 基因表達：高表達c-myc、c-myb、v-fms、Ha-ras、Ki-ras、N-ras和c-raf 1 mRNA。神經絲(si) 三聯體(ti) 蛋白陰性；

• 表達標記：胰島素樣生長因子II（IGF-II）

• 表達四種生化標誌物，包括神經元特異性烯醇化酶、肌酸激酶腦同工酶、L-DOPA脫羧酶和類蛙皮素免疫反應性。

• 致瘤性：在裸小鼠中能夠生成腫瘤。
  

• 轉移性：主要轉移至骨髓。

• 癌症基因：攜帶多種癌基因，包括myc+、myb+、raf+、ras+等，部分基因如fes-則未被發現。

• 免疫表型：加壓素陰性、催產(chan) 素陰性、胃泌素釋放肽陰性，波形蛋白和角蛋白免疫染色陽性

• NCI-H146細胞產(chan) 生大量的c-myc mRNA，盡管c-myc DNA未發生擴增。

• 同工酶：AK-1，1，ES-D，1，G6PD，B；GLO-I，1；Me-2，2；PGM1，1-2；PGM3，1-2

NCI-H146細胞參數表

NCI-H146人小細胞肺癌細胞培養教程

細胞複蘇步驟

• 預熱37℃水浴，確保使用的培養(yang) 基為(wei) 完全培養(yang) 基（RPMI 1640 + 10% 胎牛血清（FBS）+ 1% 抗生素-抗真菌藥物混合物）。
  

• 準備好5 mL完全培養(yang) 基裝入離心管備用。

• 將H146細胞的凍存管置於(yu) 37℃水浴中，輕輕晃動凍存管以加速解凍過程，約需1-2分鍾。確保凍存管的管口始終高於(yu) 水麵，以避免汙染。
  

• 解凍後，迅速用70%乙醇擦拭凍存管外部進行消毒。

• 在無菌操作台中，將凍存管中的H146細胞懸液轉移至盛有5 mL完全培養(yang) 基的離心管中。

• 以200×g的速度離心5-10分鍾，去除上清液。

• 用預熱至37℃的完全培養(yang) 基重新懸浮H146細胞，並將其轉移至新的培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中孵育，促進H146細胞恢複生長。

細胞傳代步驟

• 傳(chuan) 代時機：當H146細胞密度達到1.5×10⁶ cells/mL時，開始進行傳(chuan) 代。

• 從(cong) 培養(yang) 瓶中取出適量H146細胞懸液，用台盼藍染色法進行細胞計數，以評估細胞活力。
  

• 調整H146細胞濃度至5×10⁵ cells/mL，將其轉移至含有新鮮培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，維持適宜的細胞生長密度。

• 將培養(yang) 瓶豎直放置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中，繼續培養(yang) 。

• 換液頻率： 每隔2-3天更換一次培養(yang) 基，以維持H146細胞的健康狀態。

細胞凍存步驟

• 凍存準備： 使用無血清凍存液（如Cryo Frozen Medium）作為(wei) 冷凍保護劑。

• 收集培養(yang) 瓶中的H146細胞懸液，轉移至無菌離心管中。以1000 rpm的速度離心4分鍾，棄去上清液，用PBS洗滌一次以去除殘餘(yu) 培養(yang) 基。
  

• 加入適量凍存液（每管細胞凍存量應達到10⁶ cells/mL），輕輕混勻後分裝入凍存管中。

• 將凍存管置於(yu) -80℃的冰箱中預凍24小時後，轉移至液氮中進行長期保存。