M-NFS-60細胞（小鼠髓性白血病淋巴細胞）

M-NFS-60細胞係是從(cong) 小鼠髓性白血病中分離獲得的一種淋巴母細胞形態，最早由JF Weaver等人建立，在白血病和免疫係統疾病的研究中具有廣泛應用價(jia) 值。

M-NFS-60細胞係來源於(yu) 經過小鼠生態型逆轉錄病毒Cas-Br-MuLV感染的小鼠體(ti) 內(nei) ，這種病毒能誘導髓性白血病的發生。M-NFS-60細胞具備懸浮生長特性，形態呈淋巴母細胞樣，主要分離自小鼠的外周血或骨髓組織。由於(yu) 其對IL-3和M-CSF等生長因子的依賴性，體(ti) 外培養(yang) 時需在培養(yang) 基中添加這些因子以支持細胞的增殖和維持生長。

M-NFS-60細胞特性特征

• 永生法：病毒轉化

• M-NFS-60細胞係對多種生長因子（如白細胞介素-3 (IL-3) 和巨噬細胞集落刺激因子 (M-CSF)）具有高度敏感性。

• 基因特征：M-NFS-60細胞含有由逆轉錄病毒整合引起的截短型c-myb原癌基因。

• 表達特征：M-NFS-60細胞係在體(ti) 外培養(yang) 時表現出對多種生長因子的依賴性，尤其是IL-3和M-CSF

M-NFS-60細胞參數表

M-NFS-60小鼠髓性白血病淋巴細胞培養教程

細胞複蘇

• 將凍存的NFS60細胞懸液（1 mL）迅速放入37℃的水浴中解凍，期間輕輕搖動，確保均勻解凍。
  

• 解凍後，立即將細胞懸液轉移至含有4-6 mL預溫的完全培養(yang) 基中，培養(yang) 基成分為(wei) RPMI-1640，補充10%胎牛血清（FBS）、62 ng/mL巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）和0.05 mM β-巰基乙醇。

• 將NFS60細胞懸液以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清。
  

• 重新加入1-2 mL完全培養(yang) 基，輕輕吹打以重懸細胞。

• 將重懸後的NFS60細胞接種到T25培養(yang) 瓶或10 cm培養(yang) 皿中，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中孵育過夜。
  

• 第二天檢查NFS60細胞狀態及密度，若細胞狀態良好，可繼續培養(yang) 或換液。

NFS60細胞傳代

• 當NFS60細胞密度達到80%-90%時，應進行傳(chuan) 代。NFS60細胞係通常呈懸浮生長，定期傳(chuan) 代有助於(yu) 維持其健康的生長狀態。
  

• 棄去舊培養(yang) 基，用不含鈣、鎂離子的PBS緩衝(chong) 液輕輕衝(chong) 洗1-2次，以去除殘留培養(yang) 基。
  

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶、0.53 mM EDTA），37℃下消化1-2分鍾。大多數NFS60細胞應開始變圓或脫落，若細胞變圓及時加入培養(yang) 基終止消化。

• 將消化後的NFS60細胞重懸於(yu) 適量的完全培養(yang) 基中，離心（1000 RPM，4分鍾）後，棄去上清。
  

• 將NFS60細胞按1:2比例稀釋，並加入新的培養(yang) 基進行培養(yang) 。常用的培養(yang) 基量為(wei) 每瓶6-8 mL，確保NFS60細胞得到充分營養(yang) 供應。

NFS60細胞凍存

• 凍存液配方為(wei) ：55%基礎培養(yang) 基（RPMI-1640），40% FBS，5%二甲基亞(ya) 碸（DMSO）。DMSO應現用現配，以確保其保護NFS60細胞在冷凍過程中的有效性。
  

• 收集狀態良好的NFS60細胞並重懸於(yu) 凍存液中，每個(ge) 凍存管分裝約1 mL細胞懸液。
  

• 將凍存管置於(yu) 程序性降溫盒中，放入-80℃冰箱中逐步冷凍。過夜後將凍存管轉移至液氮中長期儲(chu) 存。
  

注意事項

• 無菌操作：在整個(ge) 操作過程中應嚴(yan) 格執行無菌操作，避免NFS60細胞汙染。

• 溫度控製：培養(yang) 箱應保持恒定的37℃溫度，CO₂濃度維持在5%。

• 生長因子添加：NFS60細胞對IL-3和M-CSF依賴性較強，確保培養(yang) 基中補充這些生長因子以維持細胞的正常生長。

• 定期觀察：及時觀察NFS60細胞的密度和形態，確保傳(chuan) 代及時，以避免細胞過度擁擠或營養(yang) 不足。