MOLM-13細胞（人急性髓性白血病細胞）

MOLM-13細胞係來源於(yu) 一位20歲男性急性髓係白血病（AML）患者的外周血樣本。該患者最初被診斷為(wei) 骨髓增生異常綜合征（MDS），具體(ti) 為(wei) 難治性貧血伴幼稚細胞過多（RAEB），並於(yu) 1995年複發，診斷為(wei) FAB M5a型急性髓係白血病。

MOLM-13細胞具有懸浮生長特性，形態上接近淋巴樣母細胞。MOLM-13細胞係在體(ti) 外培養(yang) 時經過鑒定，能夠保持穩定生長，且廣泛應用於(yu) 急性髓係白血病的基礎研究和藥物篩選中。特別是由於(yu) 其攜帶FLT3突變，該細胞係常被用於(yu) FLT3靶向治療的相關(guan) 研究。MOLM-13細胞係的外顯子組和RNA測序數據已公開，可為(wei) AML相關(guan) 的分子機製和治療策略研究提供參考。MOLM-13細胞係在急性髓係白血病病理研究和藥物開發中占據重要地位。

MOLM-13細胞特性特征

• FLT3基因突變：MOLM-13細胞攜帶FLT3基因的內(nei) 部重複序列（FLT3-ITD），這是一種常見於(yu) AML患者的突變類型。此突變導致FLT3在無配體(ti) 存在的情況下自體(ti) 磷酸化，從(cong) 而異常激活下遊信號通路，促進白血病細胞的增殖和存活。

• FLT3蛋白表達：盡管攜帶FLT3基因內(nei) 部串聯重複突變，MOLM-13細胞不表達FLT3蛋白。

• CBL基因突變：MOLM-13細胞係存在CBL基因的外顯子8缺失突變（CBLδExon8突變體(ti) ）。與(yu) MOLM-14細胞係（ACC 777）為(wei) 姊妹細胞係。

• 基因特征：FLT3基因位於(yu) 人類染色體(ti) 13q12，包含24個(ge) 外顯子。其編碼的FLT3蛋白為(wei) Ⅲ型受體(ti) 酪氨酸激酶，參與(yu) 造血幹細胞的增殖、分化和存活。研究表明，FLT3-ITD突變與(yu) AML患者的不良預後相關(guan)

MOLM-13細胞參數表

MOLM-13人急性髓性白血病細胞培養教程

MOLM13細胞複蘇

• 將水浴鍋預熱至37℃。
  

• 準備完全培養(yang) 基：90% RPMI-1640培養(yang) 基 + 10%胎牛血清（FBS）。

• 從(cong) 液氮中取出MOLM13細胞凍存管，迅速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃，確保細胞在1-2分鍾內(nei) 完全融化。
  

• 解凍後，立即將MOLM13細胞懸液轉移到含有4 mL預溫完全培養(yang) 基的無菌離心管中，輕輕混合均勻。

• 以1000 rpm離心3分鍾，去除上清。
  

• 用無菌PBS清洗MOLM13細胞一次，棄去PBS後再加入1-2 mL完全培養(yang) 基，輕輕吹打混勻細胞懸液。

• 將MOLM13細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中，補充8 mL完全培養(yang) 基，放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中，靜置培養(yang) 過夜。
  

MOLM13細胞培養

• 培養(yang) 基：RPMI-1640培養(yang) 基（90%）+ FBS（10%）+ 青黴素-鏈黴素抗生素（PS）。
  

• 培養(yang) 環境：37℃恒溫培養(yang) 箱，95%空氣和5% CO₂的氣相環境。

• 複蘇後第二天檢查MOLM13細胞狀態，觀察細胞的生長情況及是否有汙染現象。
  

• 若MOLM13細胞密度達到80%-90%，需及時進行傳(chuan) 代。

MOLM13細胞傳代

• 當MOLM13細胞密度達到80%-90%時，可以進行傳(chuan) 代操作。MOLM13細胞係為(wei) 懸浮生長，易於(yu) 收集。
  

• 推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2或1:3。根據細胞生長情況，可將一個(ge) T25瓶的MOLM13細胞分成2-3個(ge) 新T25瓶。
  

• 將培養(yang) 的MOLM13細胞收集至無菌離心管中，1000 rpm離心3-5分鍾。
  

• 去除上清後，用新鮮培養(yang) 基重懸MOLM13細胞。按1:2或1:3的比例將細胞懸液分配到新的培養(yang) 瓶中，補充8 mL完全培養(yang) 基。

• 傳(chuan) 代時必須使用新製備的培養(yang) 基，運輸過程中使用的培養(yang) 基不可繼續用於(yu) MOLM13細胞培養(yang) 。
  

• 由於(yu) 溫度變化或運輸過程中的機械振動，部分MOLM13細胞可能會(hui) 死亡或破裂，這是正常現象。

MOLM13細胞凍存

• 收集生長狀態良好的MOLM13細胞，將其離心（1000 rpm，4分鍾），去除上清液。
  

• 用PBS清洗MOLM13細胞一次，隨後進行細胞計數。

• 按照5 x 10⁶至1 x 10⁷個(ge) MOLM13細胞/mL的濃度配製細胞懸液。使用凍存液（無血清培養(yang) 基+10%DMSO）重懸MOLM13細胞，每管1 mL細胞懸液，標明細胞係、日期及細胞濃度。
  

• 將MOLM13細胞凍存管放入-80℃冰箱進行初步冷凍24小時，隨後轉移至液氮中長期保存。
  

• MOLM13細胞凍存後建議盡快複蘇一支，檢測細胞活力。如果凍存後的MOLM13細胞存活率偏低，需要及時調整凍存液配方或凍存步驟。