Mino細胞（人外周血套細胞淋巴瘤細胞）

Mino細胞是從(cong) 一名64歲白人男性患者的外周血中分離出的套細胞淋巴瘤（Mantle Cell Lymphoma, MCL）細胞係。該患者被診斷為(wei) 複發型MCL，Mino細胞係的建立為(wei) 套細胞淋巴瘤的研究提供了重要的工具，尤其在免疫學和癌症研究中具有廣泛應用。

Mino細胞起源於(yu) 外周血單核細胞（PBMCs），具有淋巴母細胞的特征，在體(ti) 外可以以懸浮狀態單獨或成簇生長。Mino細胞為(wei) 超三倍體(ti) ，染色體(ti) 數為(wei) 74，且存在特定染色體(ti) 異常，例如t(11;14)易位和del(6)(q16)等。此細胞係的關(guan) 鍵腫瘤抑製基因如p53、p16 (INK4a)和p21 (WAF1)均有表達。mino細胞使研究人員能夠更深入地探討MCL的分子機製，特別是在細胞周期調控和腫瘤抑製相關(guan) 基因方麵的變化，有助於(yu) 推動對該疾病的潛在治療策略的發展。

Mino細胞特性特征

• 形態：Mino細胞呈淋巴母細胞形態，通常較大，可以在體(ti) 外以懸浮方式生長，也可以成簇生長。
  

• 生長方式：mino細胞係能夠在培養(yang) 基中以懸浮狀態生長，適合進行各種實驗研究。

• 免疫表型：流式細胞術檢測顯示：CD3-、CD5+、CD10-、CD19+、CD20+、CD23-（在ATCC驗證）

• 基因表達：細胞周期蛋白D2；細胞周期蛋白D3；p53；p16基因（INK4a）；p21（WAF1）

• Western印跡還表明細胞周期蛋白D1的表達，而D2和D3的表達較弱或未檢測到。

• 視網膜母細胞瘤蛋白主要被磷酸化。
  

Mino細胞參數表

Mino人外周血套細胞淋巴瘤細胞培養教程

收到細胞後的處理

• 檢查包裝：收到Mino細胞後，首先檢查凍存管是否完整，確認無漏液現象。如發現漏液，請拍照記錄並聯係供應商。

• 顯微鏡觀察：將T25培養(yang) 瓶去掉封口膜，置於(yu) 37℃培養(yang) 約2-3小時，以便Mino細胞恢複生長。使用顯微鏡觀察細胞的狀態，確保Mino細胞活性良好。

複蘇Mino細胞

• 解凍細胞：將凍存管中的1mL Mino細胞懸液迅速放入37℃水浴中解凍，搖晃均勻混合。

• 加入4mL的培養(yang) 基並混合均勻。
  

• 在1000 RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液。

• 補加1-2mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹勻。

• 接種：將Mino細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，或將其加入10cm培養(yang) 皿中，添加約8mL培養(yang) 基，培養(yang) 過夜以促使細胞附著和生長。

檢查Mino細胞狀態

• 第二天更換培養(yang) 基，並檢查Mino細胞的密度。若細胞密度達到80%-90%，即可進行傳(chuan) 代。

細胞傳代

• 清洗：棄去培養(yang) 上清液，使用不含鈣、鎂離子的PBS輕洗Mino細胞1-2次。

• 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶和0.53mM EDTA），放入37℃培養(yang) 箱消化1-2分鍾。

• 在顯微鏡下觀察消化情況，若Mino細胞大部分變圓並脫落，迅速取回操作台，輕輕敲擊培養(yang) 瓶並加入培養(yang) 基以終止消化。

• 在每瓶補加6-8mL培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000 RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液。

• 補加1-2mL新鮮培養(yang) 基並輕輕吹勻。

• 分配：將Mino細胞懸液以1:2的比例分配到新的培養(yang) 皿或瓶中，每個(ge) 新皿中加入8mL培養(yang) 基。

Mino細胞凍存

• 當Mino細胞狀態良好時，棄去培養(yang) 基並用PBS清洗細胞。
  

• 加入1mL胰蛋白酶，待Mino細胞變圓並脫落後，加入1mL含血清的培養(yang) 基以終止消化，並使用血球計數板計數細胞。

• 在1000 RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1mL血清重懸Mino細胞，根據細胞數量加入DMSO，使其終濃度為(wei) 10%。確保每支凍存管的Mino細胞密度不低於(yu) 1x10^6/mL，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，並做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80℃冰箱保存2小時，然後轉入液氮中長期儲(chu) 存。記錄凍存管的位置以便後續取用。