MC/CAR（人外周血淋巴細胞）

MC/CAR人外周血淋巴細胞係是由一名81歲患有漿細胞瘤的白人男性的外周血中分離出來的淋巴母細胞樣細胞係。盡管其起源於(yu) 漿細胞瘤患者，但研究表明MCCAR細胞是由EBV（Epstein-Barr virus）轉化的B淋巴母細胞係。MCCAR細胞可作為(wei) 人類融合細胞係使用。

MC/CAR細胞保持正常的雄性二倍體(ti) 特性。MCCAR細胞係由RittsREJ建立。

MC/CAR人外周血淋巴細胞特性特征

分子和表達特征

• 表達免疫球蛋白，但不分泌

• 無表麵免疫球蛋白

• 表達補體(ti) （C3b）標記

• 細胞質中存在IgG1和κ輕鏈

抗原表達

• HLA表達：A1、A33/31、B7、B18、DRw1、DRw2

• CD標記：CD11a+、CD19+、CD20+、CD28-、CD38+

其他特征

• 基因表達：表達免疫球蛋白基因

• 同工酶特征：ADA 1、AK-1 1、ES-D 1、G6PD B、GLO-I 1、PGM1 1、PGM3 1

• 功能特性：產(chan) 生但不分泌免疫球蛋白、可作為(wei) 人類融合係、8-氮鳥嘌呤突變體(ti) 可被克隆或誘變用於(yu) HAT敏感培養(yang)

• 致瘤性：在裸鼠皮下接種107個(ge) 細胞可致瘤，21天內(nei) 100%發展腫瘤

MC/CAR人外周血淋巴細胞參數表

MC/CAR人外周血淋巴細胞培養教程

細胞複蘇

• 將含1mL MC/CAR細胞懸液的凍存管在37℃水浴中快速解凍。

• 加入4mL預熱的培養(yang) 基，混合均勻。

• 1000rpm離心3分鍾，棄上清。

• 用1-2mL培養(yang) 基重懸MC/CAR細胞。

• 將MC/CAR細胞懸液轉移到含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶或6cm培養(yang) 皿中。

• 培養(yang) 過夜，第三天換液並檢查MC/CAR細胞密度。

細胞傳代

• 推薦傳(chuan) 代比例：1:2到1:4

• 當MC/CAR細胞密度達到80-90%時進行傳(chuan) 代

• 收集懸浮的MC/CAR細胞，1000rpm離心5分鍾。

• 棄上清，用新鮮完全培養(yang) 基重懸MC/CAR細胞。

• 按1:2到1:4的比例分配到新的培養(yang) 瓶中。

細胞凍存

• 收集生長狀態良好的MC/CAR細胞。

• 1000rpm離心5分鍾，棄上清。

• 用凍存液重懸MC/CAR細胞（55%基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO）。

• 將MC/CAR細胞懸液分裝到凍存管中。

• 使用程序降溫盒或-80℃冰箱緩慢降溫。

• 24小時後轉移到液氮中長期保存。

注意事項

• MC/CAR細胞是懸浮生長的細胞，不需要使用胰蛋白酶消化。

• 操作過程中保持無菌條件。

• 定期觀察MC/CAR細胞形態和生長狀態。

• 使用前將培養(yang) 基、PBS等溶液預熱至37℃。

常見問題及解決方法

• 細胞生長緩慢或停滯

• 原因：培養(yang) 基成分不適、培養(yang) 條件不合適、MC/CAR細胞密度過低。

• 解決(jue) 方法：確保使用正確的培養(yang) 基（IMDM + 20% FBS + 1% P/S），並維持培養(yang) 溫度在37℃，氣相為(wei) 95%空氣和5% CO2。確保MC/CAR細胞密度適宜，傳(chuan) 代時按1:2到1:4的比例分瓶。

• 細胞汙染

• 原因：操作不當、培養(yang) 基或器皿汙染。

• 解決(jue) 方法：嚴(yan) 格遵守無菌操作規程，定期更換培養(yang) 基，使用經過滅菌處理的培養(yang) 器皿和培養(yang) 基。

• 細胞形態異常

• 原因：培養(yang) 條件不適、MC/CAR細胞老化或汙染。

• 解決(jue) 方法：檢查培養(yang) 條件是否符合要求，確保培養(yang) 基新鮮和無汙染。如懷疑MC/CAR細胞老化，考慮從(cong) 凍存庫中複蘇新的細胞。

• 細胞不易傳代

• 原因：MC/CAR細胞密度過低或傳(chuan) 代方法不當。

• 解決(jue) 方法：確保MC/CAR細胞達到80-90%密度時進行傳(chuan) 代。傳(chuan) 代時，收集懸浮的MC/CAR細胞，1000rpm離心5分鍾，棄上清後用新鮮培養(yang) 基重懸細胞。

• 細胞凍存和複蘇問題

• 原因：凍存液配製不當、凍存或複蘇過程操作不當。

• 解決(jue) 方法：使用正確的凍存液（55%基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO），確保凍存過程緩慢降溫，複蘇時快速解凍並迅速加入預熱的培養(yang) 基。

• 細胞致瘤性實驗失敗

• 原因：MC/CAR細胞狀態不佳、接種數量不足。

• 解決(jue) 方法：確保MC/CAR細胞狀態良好，接種足夠數量的MC/CAR細胞（10^7個(ge) 細胞），並嚴(yan) 格按照實驗操作規程進行。

• 免疫球蛋白表達異常

• 原因：培養(yang) 條件不適、MC/CAR細胞狀態不佳。

• 解決(jue) 方法：確保培養(yang) 條件適宜，定期檢查MC/CAR細胞狀態，必要時調整培養(yang) 基成分或傳(chuan) 代頻率。