NE4C細胞（小鼠神經幹細胞） （暫不提供）

NE-4C小鼠神經幹細胞係是一種源自9日齡小鼠胚胎腦囊泡、缺乏功能性p53基因的神經幹細胞。ne-4c細胞係廣泛應用於(yu) 神經科學研究，具有自我更新和多向分化的潛能，能夠在適宜的條件下分化為(wei) 神經元和星形膠質細胞。NE-4C細胞在形態上呈現上皮樣，並以貼壁形式生長。

NE4C細胞特性特征

• 誘導分化：在視黃酸的誘導下，NE-4C細胞能夠分化為(wei) 神經元和星形膠質細胞。
  

• 植入實驗：轉染GFP的NE-GFP-4C細胞植入成年、新生和胎兒(er) 小鼠的前腦或早期雞胚的中腦和前腦囊泡中，能夠發育出形態分化的神經元。

• 抗原表達：NE-4C細胞表達多個(ge) 關(guan) 鍵的幹細胞標誌物：Sox-2、Otx-2、En-1。

• 基因缺失：由於(yu) 來源於(yu) p53基因敲除小鼠，NE-4C細胞缺乏功能性p53基因，這可能影響細胞的增殖和凋亡機製。

• 細胞周期調控：p53基因的缺失可能使得NE-4C細胞在細胞周期調控和應激反應方麵表現出不同於(yu) 正常細胞的特征。

NE4C細胞參數表

NE4C小鼠神經幹細胞培養教程

細胞複蘇

• 預熱37℃水浴鍋。
  

• 配製好NE4C細胞的培養(yang) 基，使用MEM基礎培養(yang) 基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素（青黴素-鏈黴素）。

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖晃解凍，解凍過程應在1-2分鍾內(nei) 完成。
  

• NE4C細胞解凍後，立即加入4 mL預熱的培養(yang) 基，輕輕混勻以稀釋DMSO。

• 在1000 rpm下離心3分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打NE4C細胞，使其均勻懸浮。

• 將NE4C細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基，置於(yu) 培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
  

• 第二天更換培養(yang) 基，檢查NE4C細胞密度與(yu) 狀態。

NE4C細胞傳代

• 當NE4C細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳(chuan) 代操作。
  

• 準備不含鈣、鎂離子的PBS溶液用於(yu) 洗滌細胞。

• 棄去培養(yang) 上清液，用PBS潤洗細胞1-2次，以去除殘留培養(yang) 基和代謝廢物。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，確保覆蓋NE4C細胞表麵。
  

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中，消化1-3分鍾，觀察NE4C細胞狀態。當細胞變圓並開始脫落時，即可終止消化。

• 輕敲培養(yang) 瓶壁，加入2-3 mL含有10% FBS的培養(yang) 基終止消化，輕輕混勻。
  

• 將NE4C細胞懸液轉移至無菌離心管中，1000 rpm離心4-5分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基，輕輕吹打NE4C細胞懸液均勻。
  

• 按1:2比例將NE4C細胞接種至新的T25培養(yang) 瓶中，加入8 mL培養(yang) 基。

• 將新接種的培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。
  

NE4C細胞凍存

• 當NE4C細胞狀態良好時，可進行凍存操作。
  

• 將NE4C細胞及培養(yang) 液轉移至無菌離心管中。

• 在1000 rpm下離心4分鍾，棄去上清液後，用PBS清洗NE4C細胞一次。
  

• 使用細胞計數器或台盼藍染色法計數NE4C細胞，調整細胞濃度至1×10^6 cells/mL。
  

• 將NE4C細胞懸液與(yu) 凍存液按1:1混合，凍存液配方為(wei) 90%胎牛血清 + 10% DMSO。
  

• 將混合液分裝至凍存管中，做好標記。
  

• 先將凍存管放入-80℃冰箱中逐步降溫，之後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 所有操作均應在無菌條件下進行，以避免NE4C細胞汙染。

• 所有試劑和培養(yang) 基應在使用前預熱至37℃，以保證NE4C細胞在適宜的溫度下操作。

• 定期檢查NE4C細胞的生長狀態，及時傳(chuan) 代或調整培養(yang) 條件，確保細胞健康與(yu) 活力。

溫度對NE4C細胞的影響

• 生長表現：在37℃的標準培養(yang) 條件下，NE4C細胞增殖速度較快，倍增時間約為(wei) 12小時。當細胞密度達到80%-90%時適合進行傳(chuan) 代操作。NE4C細胞形態通常呈上皮樣，生長狀態良好。

• 低溫影響：當溫度低於(yu) 37℃時（如室溫或4℃），NE4C細胞生長速率會(hui) 顯著降低，可能導致細胞凋亡或生長停滯。

• 高溫影響：超過37℃的環境（如40℃或更高）會(hui) 導致NE4C細胞受到熱應激，可能引發細胞死亡。因此，應嚴(yan) 格控製培養(yang) 溫度，以保證NE4C細胞的正常生長