LMTK細胞（小鼠胸腺激酶缺陷細胞）

LM/TK [LMTK-]小鼠胸腺激酶缺陷細胞係是從(cong) 100天大的雄性小鼠的皮下結締組織（主要為(wei) 乳暈和脂肪組織）分離出的細胞，具有成纖維細胞樣形態，表現為(wei) 貼壁生長，LMTK細胞為(wei) 自發永生化細胞。LM/TK細胞係常用於(yu) 轉染實驗，尤其是在與(yu) L Wnt-3A和L Wnt-5A細胞的條件培養(yang) 基比較中作為(wei) 對照使用。

LMTK細胞係具有超二倍體(ti) 的染色體(ti) 數，模態數為(wei) 45，範圍在42到48之間。核型分析顯示，細胞中常見21個(ge) 標記染色體(ti) ，其中包括13條雙臂染色體(ti) 和8條頂著絲(si) 粒染色體(ti) 。此外，還存在通過羅伯遜易位產(chan) 生的4個(ge) 標記染色體(ti) ，分別來自4、12、14和15號染色體(ti) 。正常的X、12、14、15和16號染色體(ti) 缺失，X染色體(ti) 以Rb（X.3）臂的形式存在。詳細的核型描述可參考《癌症遺傳(chuan) 學》中的文獻（Cytogenet Cell Genet, 24:95-107, 1987）。

LMTK細胞特性特征

• 基因缺陷：LMTK細胞缺乏胸腺激酶（Thymidine Kinase, TK），使其對某些藥物（如HAT）敏感，同時具有5-溴-2'-脫氧尿苷（BrdUrd）抗性。

• 致瘤性：在裸小鼠模型中，LM/TK細胞具有致瘤性，皮下接種10^7個(ge) 細胞後，21天內(nei) 以100%的頻率出現腫瘤。
  

• 抗原表達：LMTK細胞係表達H-2k抗原，表明其在免疫係統中的潛在應用。

• LMTK細胞經檢測發現鼠痘病毒呈陰性。
  

LMTK細胞參數表

LMTK小鼠胸腺激酶缺陷細胞培養教程

細胞複蘇

• 配製完全培養(yang) 基：DMEM培養(yang) 基中添加10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S）。
  

• 將凍存的LMTK細胞從(cong) 液氮中取出，並迅速放入37℃的水浴中，輕輕搖動凍存管，確保LMTK細胞均勻解凍。

• 細胞解凍後，立即將LMTK細胞懸液轉移至離心管中，加入4 mL完全培養(yang) 基以稀釋細胞懸液。
  

• 在1000 RPM（約250 g）下離心4分鍾，棄去上清液，保留LMTK細胞沉澱。
  

• 加入1-2 mL完全培養(yang) 基，將LMTK細胞輕輕吹打以充分懸浮。
  

• 將重懸後的LMTK細胞移入T25培養(yang) 瓶中，並置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。培養(yang) 環境應為(wei) 95%空氣和5% CO₂。
  

細胞培養

• 使用DMEM培養(yang) 基，補充10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S），適合LMTK細胞的生長。
  

• LMTK細胞的培養(yang) 溫度應保持在37℃，氣相條件為(wei) 95%空氣和5% CO₂。
  

• 每周換液2-3次，以維持LMTK細胞的最佳生長狀態。
  

細胞傳代

• 當LMTK細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去培養(yang) 基，用不含鈣、鎂的PBS溶液洗滌LMTK細胞1-2次。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察LMTK細胞是否變圓並開始脫落。
  

• 迅速加入4-6 mL完全培養(yang) 基終止消化過程，輕輕吹打使LMTK細胞完全懸浮。
  

• 在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清液。將LMTK細胞重懸於(yu) 1-2 mL完全培養(yang) 基中，然後按1:3至1:4的比例接種到新的培養(yang) 瓶中。
  

細胞凍存

• 使用以下比例配置凍存液：55%基礎培養(yang) 基、40%胎牛血清（FBS）和5%二甲基亞(ya) 碸（DMSO），適合LMTK細胞的凍存。
  

• 按上述傳(chuan) 代步驟收集LMTK細胞，離心後棄去上清液。
  

• 將LMTK細胞重懸於(yu) 預先準備好的凍存液中，確保混合均勻。
  

• 將LMTK細胞懸液分裝入凍存管中，並做好標簽標識。
  

• 將凍存管逐步降溫，首先在-80℃冰箱中冷凍，隨後移至液氮罐中長期保存。
  

注意事項

• LMTK細胞係僅(jin) 供科研使用，不得用於(yu) 人類或動物的治療。

• 定期監測LMTK細胞是否有汙染跡象，如有汙染應立即處理。

• 操作過程中應嚴(yan) 格遵守生物安全規程，確保實驗室環境安全。