CHO-K1細胞（倉(cang) 鼠卵巢細胞亞(ya) 株）

CHO-K1細胞（Chinese Hamster Ovary K1），中國倉(cang) 鼠卵巢細胞K1亞(ya) 克隆，源自親(qin) 本CHO細胞係。CHO-K1細胞係於(yu) 1957年由Theodore Puck在波士頓癌症研究基金會(hui) 實驗室首次分離，來源為(wei) 成年雌性中國倉(cang) 鼠的卵巢組織。CHO-K1細胞自1948年起在美國用於(yu) 多種生物醫學研究，隨著亞(ya) 克隆CHO-K1的分離，逐漸成為(wei) 實驗室研究和工業(ye) 生產(chan) 中的重要工具。

CHO-K1細胞廣泛應用於(yu) 生物技術和醫藥研究，尤其適合作為(wei) 蛋白質藥物生產(chan) 和重組蛋白表達的宿主係統。1968年的研究還揭示了CHO-K1細胞缺乏合成甘氨酸的關(guan) 鍵基因，因此需要在培養(yang) 基中額外補充脯氨酸以維持其正常生長。

CHO-K1細胞特性特征

• 倍體(ti) 性：CHO-K1細胞的染色體(ti) 組成為(wei) 2n=22，屬於(yu) 亞(ya) 二倍體(ti) （hypodiploid），表現出一定的遺傳(chuan) 不穩定性。

• 營養(yang) 需求：CHO-K1細胞需要培養(yang) 基中添加脯氨酸以支持其生長，因為(wei) 它缺乏合成脯氨酸的能力。
  

• 培養(yang) 條件：適合在無血清或無動物成分的培養(yang) 基中生長，能夠在高密度下進行懸浮培養(yang) 。

• 病毒感染：CHO-K1細胞對水皰性口炎病毒（包括印第安納州和格拉斯哥株）及蓋塔病毒具有易感性。
  

• 基因組穩定性：CHO-K1細胞的基因組可能經曆了大規模的染色體(ti) 重排，導致不同細胞係間染色體(ti) 數目不一致。
  

• 翻譯後修飾能力：CHO-K1細胞能夠進行複雜的翻譯後修飾，生成與(yu) 人類蛋白質相似的糖蛋白，是成為(wei) 生產(chan) 生物仿製藥的理想宿主。

• 組蛋白表達：CHO-K1細胞常用於(yu) 重組蛋白的表達，能夠有效地插入複雜的N-連接聚糖，有助於(yu) 蛋白質折疊和運輸。其糖基化模式接近人類細胞，這提高了蛋白質在體(ti) 內(nei) 的穩定性和活性。
  

• 高產(chan) 能力：CHO-K1細胞係在大規模培養(yang) 中表現出高水平的蛋白質表達，適合用於(yu) 工業(ye) 化生產(chan) 。

• 遺傳(chuan) 背景：CHO-K1細胞缺乏甘氨酸生物合成所需的基因，這一遺傳(chuan) 缺陷使其依賴於(yu) 外源性的脯氨酸。此外，CHO-K1細胞與(yu) 大多數人類硫酸乙酰肝素葡糖胺O-磺基轉移酶有同源基因，這表明其在某些代謝途徑上與(yu) 人類存在相似性
  

CHO-K1細胞參數表

CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株培養教程

CHO-K1細胞複蘇

• 將CHO-K1細胞凍存管在37℃水浴中快速解凍，輕輕搖晃以防細胞損傷(shang) 。
  

• 將解凍後的CHO-K1細胞懸液加入4-6 mL完全培養(yang) 基中，混合均勻。

• 在1000 RPM下離心3-5分鍾，棄去上清液，以確保CHO-K1細胞活性。
  

• 用新配製的培養(yang) 基重懸CHO-K1細胞，隨後將細胞懸液加入6-8 mL完全培養(yang) 基的T25培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
  

• 第二天觀察CHO-K1細胞的貼壁和增殖情況，確保CHO-K1細胞的複蘇順利。
  

CHO-K1細胞傳代

• 當CHO-K1細胞密度達到80%-90%時，準備進行傳(chuan) 代操作。
  

• 方法一： 收集CHO-K1細胞後離心4分鍾，去上清，用1-2 mL培養(yang) 基重懸CHO-K1細胞，按1:2至1:5比例分至新的培養(yang) 瓶中，補充8 mL培養(yang) 基。
  

• 方法二： 半數換液方式，棄去培養(yang) 基的一半，輕輕懸起CHO-K1細胞，將懸液按1:2至1:3的比例分裝至新皿或瓶中，加8 mL培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

CHO-K1細胞無血清馴化

• 逐步降低血清濃度

• 將貼壁的CHO-K1細胞換液，加入15 mL含血清的培養(yang) 基和15 mL無血清培養(yang) 基的混合液。

• 每隔兩(liang) 天替換一半培養(yang) 基，並補充等量的無血清CHO-K1細胞培養(yang) 基，逐步降低胎牛血清濃度至低於(yu) 1%。

• 血清濃度逐步降低

• 逐步降低CHO-K1細胞培養(yang) 中的血清濃度至5%、2.5%、1.25%、0.625%、0%，最後在無血清的基礎培養(yang) 基（B001）中繼續培養(yang) CHO-K1細胞。

• 獲得懸浮CHO-K1細胞

• 當CHO-K1細胞密度在無血清培養(yang) 基中達到5×10⁶ cells/mL時，即可獲得懸浮狀態的CHO-K1細胞。

CHO-K1細胞凍存

• 準備CHO-K1細胞懸液

• 收集消化後的CHO-K1細胞，用血球計數板計數，以確定凍存密度。推薦凍存濃度為(wei) 1×10⁶至1×10⁷個(ge) 活細胞/mL。

• 在1000 RPM下離心3-5分鍾，去上清液後，用配製好的凍存液重懸CHO-K1細胞。

• 每管分裝1 mL凍存液（含1×10⁶至1×10⁷個(ge) CHO-K1細胞），並標注細胞名稱、代次及日期。
  

• 將CHO-K1細胞凍存管放入程序降溫盒中，在-80℃冷凍過夜，隨後轉移至液氮罐中長期保存。
  

CHO-K1細胞培養注意事項

• 所有操作應在生物安全櫃中進行，防止CHO-K1細胞汙染。

• 保持培養(yang) 箱濕度在70%-80%，氣相為(wei) 95%空氣和5% CO₂。

• 定期記錄CHO-K1細胞狀態和密度，以確保實驗數據的連續性和準確性。