CHO細胞（中國倉(cang) 鼠卵巢細胞係）

CHO細胞（中國倉(cang) 鼠卵巢細胞）由Theodore T. Puck於(yu) 1957年首次從(cong) 中國倉(cang) 鼠（Cricetulus griseus）卵巢分離，其快速增殖和高效蛋白表達特性而廣泛用於(yu) 生物醫藥領域，尤其是治療性蛋白質的生產(chan) 。CHO細胞具有獨特的上皮細胞特性，能夠在適應後進行貼壁或懸浮培養(yang) ，且其遺傳(chuan) 不穩定性帶來多樣的表達水平，常用於(yu) 基因工程和蛋白質生產(chan) 。

CHO細胞已衍生出多種變異體(ti) ，包括未改造的CHO-K1、缺乏二氫葉酸還原酶的CHO-DG44和CHO-DXB11等，它們(men) 適用於(yu) 不同的生物製藥和蛋白質工程應用。

CHO細胞特性特征

• 糖基化能力：CHO細胞擅長進行複雜的翻譯後修飾，如N-連接糖基化，使其生產(chan) 的重組蛋白在功能和穩定性上更接近人源蛋白，提高了生物相容性和藥效。其糖基化模式與(yu) 人類細胞相似，使得其生產(chan) 的蛋白質在結構和功能上更接近天然蛋白。
  

• 非分泌型細胞：CHO細胞本身很少分泌內(nei) 源蛋白，因此在目標蛋白的分離和純化過程中具有優(you) 勢。

• 遺傳(chuan) 不穩定性：CHO細胞具有較低的染色體(ti) 數目（通常為(wei) 22條），且存在遺傳(chuan) 不穩定性。
  

• 脯氨酸缺陷：CHO細胞缺乏脯氨酸合成基因，無法將穀氨酸轉變為(wei) 穀氨酸-半醛，因此在培養(yang) 基中需要添加L-脯氨酸以支持其生長。

• 高效表達係統：CHO細胞能夠高效擴增和表達重組基因，適合用於(yu) 生產(chan) 複雜的生物大分子，如單克隆抗體(ti) 和其他治療性蛋白。
  

• 產(chan) 物分泌功能：CHO細胞能夠有效地將表達的蛋白質分泌到培養(yang) 基中，便於(yu) 後續的分離和純化。

CHO細胞參數表

CHO細胞－倉鼠卵巢細胞係培養教程

CHO細胞複蘇

• 預熱培養(yang) 基：將水浴鍋預熱至37℃，準備5-10 mL的完全培養(yang) 基，以適應CHO細胞生長的溫度。

• 細胞解凍：將凍存的CHO細胞迅速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖動以加速融化（約1-1.5分鍾）。

• 消毒：解凍後，用75%乙醇擦拭離心管外壁並轉移至超淨工作台，保持CHO細胞無菌環境。

• 離心：將解凍的CHO細胞移入含5-10 mL培養(yang) 基的離心管中，以800-1000 rpm離心5分鍾，去除冷凍保護劑。

• 重懸：棄去上清，加入新鮮培養(yang) 基重懸CHO細胞，確保細胞均勻分散。

• 接種：將CHO細胞轉移至培養(yang) 瓶中，做好標記（包括CHO細胞係名稱、代次、日期等信息），並置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 。

CHO細胞傳代

• 觀察生長狀態：當CHO細胞密度達到80%-90%時，可進行傳(chuan) 代。

• 更換培養(yang) 液：棄去舊培養(yang) 液，用PBS洗滌CHO細胞1-2次以去除血清殘留。

• 消化細胞：加入1 mL的0.25%胰蛋白酶，置於(yu) 37℃數分鍾，觀察CHO細胞形態。當細胞呈圓形並逐漸脫落時，立即終止消化。

• 終止消化：加入含血清的培養(yang) 基中和胰蛋白酶。

• 離心與(yu) 重懸：輕輕拍打瓶壁使CHO細胞完全脫落，移至離心管中，800-1000 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 接種新瓶：根據需要稀釋CHO細胞濃度，將其移至新的培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) 。

血清逐步減少法（適用於無血清培養）

• 如果實驗需要無血清培養(yang) 環境，可以通過逐步降低血清濃度的方式適應CHO細胞生長：

• 初始使用10%血清的培養(yang) 基，然後逐步減少至5%、2.5%，直至CHO細胞適應低血清環境。

注意事項

• 避免過度消化：在使用胰蛋白酶消化時應密切觀察CHO細胞形態，以避免因過度消化導致細胞損傷(shang) 。

• 無菌操作：CHO細胞培養(yang) 全程需嚴(yan) 格無菌操作，以防止汙染。

• 監控環境：確保pH值和溶氧量適宜。過高或過低的二氧化碳濃度和pH值均可能影響CHO細胞的生長。

• 溫和混勻：重懸和接種時動作應輕柔，以防CHO細胞機械損傷(shang) 。