COS7細胞係（非洲綠猴SV40轉化的腎細胞）

COS-7細胞係是從(cong) 非洲綠猴（Chlorocebus aethiops）腎髒細胞經過SV40病毒轉化而得到的細胞係，其來源追溯至最初從(cong) 非洲綠猴腎髒組織分離出的CV-1細胞。在1980年代初，研究人員通過將帶有編碼野生型T抗原並具有起始失活突變的SV40病毒轉染到CV-1細胞中，成功建立了COS7細胞。COS7細胞攜帶了SV40基因組中全部早期區域的組成型拷貝，持續表達SV40 T抗原，具備增殖能力和高效的轉染特性。

COS7細胞形態類似於(yu) 成纖維細胞，在體(ti) 外條件下具有顯著的增殖優(you) 勢，適用於(yu) 長時間培養(yang) 。COS7細胞廣泛應用於(yu) 多種生物學研究，包括基因表達、蛋白質生產(chan) 及藥物篩選等領域，是一種極為(wei) 重要的細胞模型係統。

COS7細胞係特性特征

• COS7細胞含有來自SV40基因組全部早期區域的組成型拷貝，這使得它們(men) 能夠持續表達SV40 T抗原。
  

• T抗原的表達使得COS7細胞具備了無限增殖的能力，並提高了其轉染效率。

• COS7細胞常用於(yu) 研究基因表達和蛋白質功能，尤其是在類固醇生成和受體(ti) 功能相關(guan) 的研究中。
  

• 研究表明COS7細胞能夠將激素如睾酮代謝為(wei) 其他類固醇產(chan) 物

COS7細胞係參數表

COS7非洲綠猴SV40轉化的腎細胞培養教程

COS7細胞複蘇步驟

• 取出COS7細胞凍存管：將凍存的COS7細胞從(cong) 液氮罐中取出。

• 快速解凍：在37℃水浴中快速解凍1-2分鍾，輕輕搖動凍存管，直到細胞完全融化。

• 將解凍後的COS7細胞懸液轉移到離心管，加入4-6 mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕混勻。
  

• 以1000 RPM離心3-5分鍾，去除上清液，減少DMSO對COS7細胞的毒性。

• 重懸COS7細胞：加入6-8 mL預熱的完全培養(yang) 基，將細胞輕輕吹打均勻。

• 接種培養(yang) ：將重懸的COS7細胞移至培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿，置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

COS7細胞傳代

• 觀察細胞密度：當COS7細胞密度達80%-90%時，即可進行傳(chuan) 代。

• 棄去舊培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液清洗COS7細胞1-2次，以去除血清殘留，防止胰蛋白酶消化過程受影響。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA的混合消化液（如T25瓶使用1-2 mL），在37℃下消化1-2分鍾。
  

• 在顯微鏡下觀察細胞是否變圓、脫落，迅速加入含10% FBS的培養(yang) 基中和消化作用。

• 將消化後的COS7細胞轉移到離心管，以500 g離心2分鍾，棄去上清液。
  

• 加入適量培養(yang) 基重懸細胞，根據實驗需求進行細胞計數。

• 接種新培養(yang) 瓶：按1:2至1:4的比例將COS7細胞接種至新培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中。

COS7細胞凍存

• 製備COS7細胞凍存液：使用90%胎牛血清和10% DMSO的混合液作為(wei) COS7細胞凍存液。

• 收集細胞：在凍存前將已傳(chuan) 代的COS7細胞離心，去除上清液，加入凍存液並輕輕混勻。

• 分裝與(yu) 冷凍：將混勻的COS7細胞懸液分裝至凍存管中，每管約1 mL。

• 將凍存管放入程序降溫盒中，在-80℃環境下預凍一夜後，轉入液氮中長期保存。