vero細胞（非洲綠猴腎細胞）

Vero細胞源自非洲綠猴（Chlorocebus sabaeus）的腎髒上皮細胞。1962年3月27日，日本千葉大學的安村美博首次從(cong) 一隻正常成年非洲綠猴的腎髒中分離出該細胞係。該名稱“Vero”取自世界語，意指“綠色的腎髒”（Verda Reno），同時亦有“真相”之意。1964年6月15日，B. Shimizu博士將第93代Vero細胞係從(cong) 千葉大學帶至美國國立衛生研究院國家過敏和傳(chuan) 染病研究所的熱帶病毒學實驗室。

Vero細胞係表現為(wei) 非整倍性且具有亞(ya) 二倍體(ti) 的染色體(ti) 特點。其染色體(ti) 數目異常，模式染色體(ti) 數為(wei) 58，約66%的細胞中可觀察到這一數量。大部分細胞含有結構上異常的標記染色體(ti) ，而A3、A4、B4和B5染色體(ti) 的缺失現象尤為(wei) 明顯。染色體(ti) B2、B3和B7在部分細胞中會(hui) 形成偶對，而B9、C1和C5通常配對。高倍性細胞占總細胞比例的1.7%左右，此外，染色體(ti) 大多以單拷貝存在。

Vero細胞因其特有的遺傳(chuan) 特性而在病毒學、疫苗開發和病原體(ti) 檢測等領域得到廣泛應用，適用於(yu) 檢測verotoxin的存在以及支原體(ti) 和疫苗的質量控製。Vero細胞還被用於(yu) 其他病毒研究、藥物篩選和食品病原體(ti) 檢測等。

vero細胞特性特征

• Vero細胞是一種非整倍性的連續細胞係，這意味著其染色體(ti) 數目異常，能夠通過多次分裂周期而不衰老。

• Vero細胞在培養(yang) 時表現出良好的貼壁生長能力，細胞膜界線清晰，胞漿透明度高。通常在傳(chuan) 代後的第三天開始形成單層，第七天形成致密單層，並在第十二天後逐漸老化。
  

• Vero細胞在病毒感染時不會(hui) 分泌幹擾素α/β，但仍具有幹擾素受體(ti) （IFNAR），能夠對外源性幹擾素作出反應。這一特性使其在病毒研究中具有重要價(jia) 值。
  

• 2014年研究顯示Vero細胞的整個(ge) 基因組序列，揭示其為(wei) 連續的非整倍性細胞係，具有染色體(ti) 數目異常的特征。這些特征使得Vero細胞在生產(chan) 疫苗和生物製藥方麵具有優(you) 勢。
  

• Vero細胞能有效表達多種蛋白質，並且作為(wei) 轉染宿主時表現出良好的轉染效率。這使得其在基因工程和疫苗開發中得到廣泛應用。
  

• Vero細胞廣泛應用於(yu) 病毒感染機製研究、疫苗生產(chan) （如狂犬病疫苗、流感疫苗等）、毒素檢測（如大腸杆菌毒素）以及生物製藥（如幹擾素、粒細胞生長因子等）的生產(chan)
  

vero細胞參數表

Vero細胞在新冠疫苗研發中的應用

• 對新冠病毒的研究：
  

• Vero-E6細胞被認為(wei) 對嚴(yan) 重急性呼吸綜合征冠狀病毒-2（SARS-CoV-2）高度敏感，適合用於(yu) 研究COVID-19的發病機製和疫苗開發。研究人員利用CRISPR/Cas9技術對Vero細胞進行基因編輯，以識別與(yu) SARS-CoV-2感染相關(guan) 的重要宿主因子。

• 基因編輯技術的應用：

• CRISPR/Cas9技術已被應用於(yu) Vero細胞，以增強對新冠病毒的研究。例如，通過基因敲除或敲入來探索與(yu) 病毒感染相關(guan) 的基因，這有助於(yu) 理解COVID-19的發病機製並開發新的治療策略和疫苗。

• WHO的認可：

• Vero細胞已被世界衛生組織（WHO）批準作為(wei) 疫苗生產(chan) 的標準細胞係，尤其是在流感和其他病毒性疫苗的生產(chan) 中。其廣泛應用確保了疫苗生產(chan) 過程中的安全性和有效性。

vero細胞（非洲綠猴腎細胞）培養教程

vero細胞複蘇步驟

• 解凍Vero細胞：將凍存的Vero細胞管放入37°C水浴中快速解凍，輕微搖晃以加快解凍速度。解凍後，將4 mL預熱的完全培養(yang) 基加入Vero細胞懸液中，輕輕混勻。

• 離心清洗：將Vero細胞以1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液，加入1-2 mL培養(yang) 基輕輕重懸。

• 初步培養(yang) ：將Vero細胞懸液轉移至含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中（如T25瓶），置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中過夜。次日更換培養(yang) 基，並觀察Vero細胞的貼壁情況。

vero細胞傳代步驟

• 準備：棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS洗滌Vero細胞1-2次，去除殘留的血清。

• 酶消化：加入0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA的混合消化液，確保覆蓋所有Vero細胞。將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化1-3分鍾，觀察細胞形態。待大部分Vero細胞變圓並脫落後，迅速取出。

• 終止消化：加入2-3 mL完全培養(yang) 基終止消化，輕輕混勻，將Vero細胞轉移至無菌離心管中。

• 離心：以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清，再加入1-2 mL培養(yang) 基重懸Vero細胞。

• 分瓶：按1:2的比例將Vero細胞懸液分配至新的培養(yang) 瓶中，補加8 mL培養(yang) 基，放回培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

vero細胞凍存步驟

• 收集Vero細胞：選擇生長狀態良好的Vero細胞，將其轉入無菌離心管中，以1000 rpm離心4分鍾，棄去上清，並用PBS清洗。

• 計數與(yu) 凍存液準備：根據Vero細胞數量加入無血清凍存液，使細胞密度達到5×10^6至1×10^7/mL，輕輕混勻。每支凍存管中加入1 mL Vero細胞懸液並標記清晰。

• 冷凍保存：將凍存管先置於(yu) -80°C冷凍24小時，然後轉入液氮中長期保存，以確保Vero細胞的活性和儲(chu) 存效果。

注意事項

• 無菌操作：在Vero細胞操作過程中，需確保環境的無菌性。使用75%酒精擦拭台麵和器具，減少汙染風險。

• 培養(yang) 基新鮮性：每次培養(yang) 和傳(chuan) 代時，建議使用新配製的完全培養(yang) 基，避免使用運輸或長時間存放的培養(yang) 基。

• 傳(chuan) 代比例：Vero細胞初次傳(chuan) 代時，建議按1:2的比例，避免在單一的T25瓶中培養(yang) 過多細胞，以防因密度過高影響Vero細胞的狀態。

• 生長狀態檢查：定期觀察Vero細胞的生長狀態，若出現生長緩慢、形態異常等情況，應及時調整培養(yang) 條件或更換培養(yang) 基。