人原代支氣管上皮細胞

人支氣管上皮細胞是一種位於(yu) 呼吸道黏膜表麵的細胞，是呼吸係統中不可或缺的一部分，是氣道黏膜層的主要組成成分。
人支氣管上皮細胞形態多樣，可呈現出單層或多層立方狀、柱狀上皮細胞，表麵覆蓋著微絨毛和纖毛等結構。這些微絨毛和纖毛的存在有助於(yu) 分泌黏液並有效清除氣道中的異物。是呼吸道的第一道防線，阻止外界有害物質如微生物、顆粒物和化學物質進入肺部。除了形成屏障外，它們(men) 還參與(yu) 各種生理過程，如免疫調節、分泌黏液以及氣道的修複和重塑。

人支氣管上皮細胞特性

• 人支氣管上皮細胞來源呼吸道黏膜表麵的細胞。

• 人支氣管上皮細胞形態多樣，可為(wei) 單層或多層立方狀、柱狀上皮細胞，表麵覆蓋微絨毛和纖毛。

• 人支氣管包括形成氣道的外部保護屏障、阻止有害物質進入肺部、免疫調節、黏液分泌、氣道修複和重塑。

• 人支氣管上皮細胞通常從(cong) 正常的支氣管組織中獲得。

人支氣管上皮細胞參數表

人原代支氣管上皮細胞分離與培養

實驗材料：

• 手術切除的含支氣管的正常肺組織

• 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA

• 6孔培養(yang) 板：用多聚賴氨酸包被

• 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青黴素、200mg/L鏈黴素和200000U/L慶大黴素，pH7.4

• 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

• 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

• 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反複清洗手術切除的肺組織；

• 使用眼科剪小心剪下肺葉中的白色支氣管組織；

• 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反複衝(chong) 洗支氣管組織；

• 將支氣管組織剪成1mm3左右大小的組織塊；

• 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反複清洗組織塊；

• 將組織塊轉入15ml離心管中，離心2min，去除1×PBS（pH=7.2）；

• 加入組織塊4-5倍體(ti) 積的胰酶，37℃水浴中消化30min，不時震蕩；

• 消化完成後，加入膠原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不時震蕩；

• 小心吸出上層懸液，轉入另一離心管中；

• 離心5min，傾(qing) 去上層液體(ti) ，加入培養(yang) 基重懸細胞，轉入6孔板中，37℃、5%CO2的培養(yang) 箱中培養(yang) 。

培養基準備：

• 角質細胞無血清培養(yang) 基或者KM，添加對應因子，再添加0.005mg/ml胰島素、500ng/ml氫化可的鬆、1%P/S來培養(yang) 細胞。

• 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

• 凍存液：90%血清，10%DMSO，液氮儲(chu) 存。

細胞處理：

• 將含有細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻；

• 離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞，加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，37℃培養(yang) 過夜；

• 若細胞密度達80%-90%，進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

細胞凍存：

• 加入含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化，將細胞懸液分裝入培養(yang) 瓶中，37℃培養(yang) 過夜；

• 第二天觀察細胞生長情況和細胞密度，進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

• 如果需要凍存細胞，建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。