
人原代輸尿管上皮細胞
- 來源:尿道組織;人輸尿管組織
- 細胞特征:貼壁,上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:原代上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基
- 其他:廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為(wei) 陽性,細胞純度高於(yu) 90%
人原代輸尿管上皮細胞源自正常人輸尿管組織。
輸尿管是一對細長的管道,連接著腎髒和膀胱,其結構包括筋膜層、肌肉層和粘膜層。粘膜層含有移行上皮細胞,通常有4-5層。輸尿管上皮細胞是輸尿管生物學研究的基礎,也是尿路上皮腫瘤和輸尿管損傷(shang) 等研究的重要對象。
輸尿管上皮細胞特性
輸尿管連接著腎髒和膀胱,呈扁圓柱狀,約25-35厘米長,直徑約為(wei) 0.5-0.7厘米。
輸尿管的結構包括三層管壁:筋膜層、肌肉層和粘膜層。粘膜層內(nei) 含有移行上皮細胞,通常呈4-5層。
人輸尿管上皮細胞是輸尿管生物學研究的基礎。
經過廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色鑒定,確定其為(wei) 輸尿管上皮細胞,細胞純度高於(yu) 90%。
細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌等病原體(ti) 。
輸尿管上皮細胞生長方式為(wei) 上皮樣,適合於(yu) 貼壁培養(yang) 。
人輸尿管上皮細胞在尿路上皮腫瘤、輸尿管損傷(shang) 和組織工程學研究等領域有廣泛應用。
輸尿管上皮細胞參數表
細胞類型 | 人輸尿管上皮細胞(人kaiyun网站安全) |
細胞來源 | 正常人輸尿管組織 |
結構特征 | 輸尿管呈扁圓柱狀,管徑約0.5-0.7厘米,全長約25-35厘米,由筋膜層、肌肉層和粘膜層組成,粘膜層含有移行上皮細胞(通常4-5層) |
細胞鑒定 | 廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性,細胞純度高於90% |
無病原體 | 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等病原體 |
生長方式 | 上皮樣,貼壁培養 |
應用領域 | 尿路上皮腫瘤、輸尿管損傷和組織工程學研究等 |
培養條件 | 氣相:95%空氣,5%二氧化碳;溫度:37攝氏度;濕度:70%-80% |
培養基配置 | kaiyun网站安全專用培養基,含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
凍存條件 | 90%FBS,10% DMSO |
倍增時間 | 每周2至3次 |
換液頻率 | 2-3天一次 |
培養教程
人原代輸尿管上皮細胞培養教程
準備工作
準備PBS(磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水)和0.25%胰酶。
準備含血清的完全培養(yang) 基並預熱至37攝氏度。
傳代步驟:
從(cong) 培養(yang) 容器中吸出用過的細胞培養(yang) 基並丟(diu) 棄。
用PBS輕輕衝(chong) 洗細胞,每10cm²培養(yang) 表麵積使用約2mL PBS。輕輕加入衝(chong) 洗液以避免攪動細胞層,前後輕柔搖晃容器數次。
從(cong) 培養(yang) 容器中吸出衝(chong) 洗液並丟(diu) 棄,向培養(yang) 瓶中加入0.25%胰酶(試劑量應足以覆蓋細胞層)。輕輕搖晃容器,使試劑完全覆蓋細胞層,對於(yu) T25細胞培養(yang) 瓶留約200 μL。
將培養(yang) 容器放在培養(yang) 箱中孵育5分鍾左右,在顯微鏡下觀察細胞解離情況。
當細胞解離程度≥90%時,傾(qing) 斜培養(yang) 容器,使細胞上液體(ti) 盡快流盡,加入所用胰酶兩(liang) 倍體(ti) 積的完全培養(yang) 基,吹打細胞層表麵數次,使培養(yang) 基分散。
將細胞轉移到無菌離心管中,以200×g的離心力離心3-5分鍾。
用最少體(ti) 積的完全培養(yang) 基重新懸浮細胞沉澱,將細胞懸液按照推薦比例稀釋,並將適量體(ti) 積的細胞懸液轉移到新的細胞培養(yang) 容器中,再將細胞放回培養(yang) 箱。
注意事項:
細胞密度越高越難消化,一般0.25%胰酶消化3-5分鍾。
當細胞難以消化時,可通過延長消化時間或分次消化。
分次消化步驟:使用預熱的PBS和胰酶進行消化,直到細胞塊中間全部收縮變圓。
相關資料
STR鑒定及相關
參考文獻
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