小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞（kaiyun网站安全）

小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞（Endothelial Progenitor Cells, EPCs）是血管內(nei) 皮細胞的重要前體(ti) ，具有顯著的增殖、遷移及分化能力，能夠參與(yu) 血管損傷(shang) 的修複和再生。外周血內(nei) 皮祖細胞來源於(yu) 骨髓，在特定的生理或病理刺激下被動員至外周血中，通過采集外周血樣本並采用密度梯度離心法和差速貼壁法進行分離和培養(yang) 。培養(yang) 過程中，EPCs呈現不規則或短梭形狀，具有良好的貼壁性，並在適宜條件下穩定增殖。作為(wei) 一種未成熟的內(nei) 皮細胞，EPCs缺乏成熟內(nei) 皮細胞的特征性表型，但能夠分化為(wei) 成熟細胞，參與(yu) 血管新生和缺血組織的再血管化。研究表明，EPCs在心腦血管疾病、外周血管病變、腫瘤血管生成及創傷(shang) 愈合中發揮重要作用，為(wei) 缺血性疾病治療、腫瘤微環境研究及組織再生提供了新思路和潛在應用價(jia) 值，成為(wei) 再生醫學與(yu) 細胞治療領域的研究熱點。

小鼠外周血內皮祖細胞特性特征

• 遊走特性：外周血內(nei) 皮祖細胞EPCs具有遊走能力，能夠遷移至損傷(shang) 部位參與(yu) 血管修複。

• 表麵標誌物：外周血內(nei) 皮祖細胞EPCs通常通過流式細胞術鑒定，常用的表麵標誌物包括CD31和CD34。CD31是內(nei) 皮細胞特異性標記，而CD34則是造血幹細胞的標記。早期內(nei) 皮祖細胞表現為(wei) CD31陽性和CD45陽性。

• 基因表達：早期外周血內(nei) 皮祖細胞EPCs表現出強烈的內(nei) 皮細胞基因表達，例如VE-cadherin、Flt-1、KDR和e-NOS等。這些基因與(yu) 內(nei) 皮細胞的功能密切相關(guan) 。隨著培養(yang) 時間的延長，早期EPCs逐漸失去CD45和CD31的表達，並弱表達KDR和VE-cadherin。

• 功能特征：早期EPCs在體(ti) 外不能形成管腔樣結構，但可以促進新生血管生成，主要通過分泌血管因子來招募成熟內(nei) 皮細胞。

• 晚期EPCs：晚期外周血內(nei) 皮祖細胞EPCs具有更強的增殖能力和更高的內(nei) 皮細胞一氧化氮（NO）生成能力，能夠更有效地促進新生血管形成。

小鼠外周血內皮祖細胞參數表

原代小鼠外周血內皮祖細胞培養教程

細胞複蘇

• 將凍存的小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞從(cong) 液氮中取出，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖晃凍存管，直至細胞完全解凍（約1-2分鍾）。

• 用75%酒精擦拭凍存管表麵後，在生物安全櫃中操作，確保無菌環境。

• 將解凍後的外周血內(nei) 皮祖細胞懸液與(yu) 4 mL完全培養(yang) 基（如EGM-2或PCM-M-25）混合，輕輕混勻以降低DMSO濃度。
  

• 將稀釋的細胞懸液轉移至15 mL離心管中，在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清液，僅(jin) 保留細胞沉澱。
  

• 補加1-2 mL完全培養(yang) 基，輕輕吹打混勻小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞沉澱，使其形成均勻的懸液。
  

• 將細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶，加入適量完全培養(yang) 基，放置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

• 第二天檢查小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞的貼壁情況和狀態，並更換培養(yang) 基，去除未貼壁的非目標細胞。

細胞傳代

• 當小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞的密度達到80%-90%時，應及時進行傳(chuan) 代，以確保細胞的活性和功能。
  

• 棄去培養(yang) 基，用無鈣鎂離子的PBS潤洗1-2次，去除培養(yang) 基殘留物並準備消化。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶+0.53 mM EDTA），在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。
  

• 觀察小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞是否變圓並開始脫落，若大部分細胞已鬆散，立即加入2倍體(ti) 積完全培養(yang) 基終止消化，並輕輕吹打使細胞脫落。

• 將細胞懸液轉移至離心管，在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 補加適量完全培養(yang) 基重懸細胞，輕輕吹勻形成均勻懸液。

• 按1:2或1:3比例將小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞分種至新培養(yang) 瓶，加入8 mL完全培養(yang) 基，繼續置於(yu) 培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

細胞凍存

• 在小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞狀態良好且密度適中時，選擇傳(chuan) 代1-2天後的細胞進行凍存。
  

• 棄去培養(yang) 基，用PBS清洗1次以去除雜質。

• 按傳(chuan) 代步驟進行細胞消化，隨後使用血球計數板計數細胞濃度，確保凍存時每管細胞數量在1×10⁶-2×10⁶之間。
  

• 製備凍存液（90%胎牛血清+10%DMSO），將其與(yu) 小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞懸液按比例混合，使DMSO終濃度為(wei) 10%。
  

• 每支凍存管加入1 mL細胞懸液，密封後標記清楚。
  

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-80℃冷凍2小時後轉存至液氮罐中長期保存。

• 記錄凍存小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞的編號、來源、凍存時間及位置，以確保後續實驗的可追溯性。
  

注意事項

• 在整個(ge) 操作過程中，務必保持無菌條件，避免汙染小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞培養(yang) 環境。

• 凍存與(yu) 複蘇時，應盡量縮短細胞暴露於(yu) 高濃度DMSO的時間，以保護細胞活性。

• 傳(chuan) 代和培養(yang) 時定期觀察細胞形態與(yu) 增殖狀態，確保小鼠外周血內(nei) 皮祖細胞處於(yu) 最佳生長條件下。