NK-92細胞（人惡性非霍奇金淋巴瘤自然殺傷(shang) 細胞）

NK-92細胞係源自一名50歲白人男性的急進性非霍奇金淋巴瘤患者的外周血單核細胞。nk92細胞係是一種白細胞介素-2（IL-2）依賴性的自然殺傷(shang) 細胞係，廣泛應用於(yu) 癌症、免疫學和毒理學研究。

NK-92細胞對多種惡性細胞表現出細胞毒性，特別在鉻釋放試驗中展示出對K562和Daudi細胞的殺傷(shang) 能力。經過輻照處理後的NK-92細胞可用於(yu) 有效清除血液中的白血病細胞，而不影響造血細胞的功能。

NK-92細胞具有以下特性和特征

• 陽性標記: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54, CD56(亮)

• 陰性標記: CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34, HLA-DR

• NK-92細胞對愛潑斯坦-巴爾病毒DNA序列呈陽性反應
  

• 分子特征：白細胞介素-2(IL-2)依賴性: NK-92細胞嚴(yan) 重依賴IL-2生長,最低需要10U/mL維持增殖

• 細胞毒性機製：具有多種細胞毒性機製,能夠通過細胞因子調節免疫反應

• 功能特征：對多種惡性細胞具有細胞毒性作用；鉻釋放試驗顯示能殺死K562和Daudi細胞；具有抗白血病、淋巴瘤、黑素瘤、前列腺癌和乳腺癌的作用

• 其他特征：細胞形態為(wei) 淋巴母細胞樣,呈懸浮生長；倍增時間約40-50小時；易於(yu) 培養(yang) 和擴增,是首個(ge) 獲FDA批準進行臨(lin) 床試驗的NK細胞係

• 局限性：在腫瘤微環境中容易出現功能耗竭；缺乏CD16表達,無法產(chan) 生抗體(ti) 依賴的細胞介導的細胞毒性(ADCC)效應

NK-92細胞參數表

NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤自然殺傷細胞培養教程

NK-92細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的NK-92細胞，迅速放入37°C水浴中，輕輕搖晃以加速解凍。

• 解凍後，立即將NK-92細胞轉移至含有10 mL培養(yang) 基的離心管中，靜置2小時以使細胞沉降。

• 小心去除上清液，保留NK-92細胞沉澱。

• 用完全培養(yang) 基重新懸浮NK-92細胞，並轉移至T25培養(yang) 瓶中進行培養(yang) 。

NK-92細胞培養

• 培養(yang) 條件:溫度: 37°C、CO₂濃度: 5%、氣相: 空氣95%，CO₂ 5%

• 生長特性: NK-92細胞以懸浮形式生長，細胞多聚集成團，少數分散。

NK-92細胞換液

• 換液頻率:

• 初期（複蘇後的1周內(nei) ）每1-2天換液1-2次。

• 隨後視NK-92細胞密度和培養(yang) 基顏色，每2-3天換液一次。

  換液方法:

• 使用“沉降法”：將培養(yang) 基連同NK-92細胞團輕柔轉移至離心管中，靜置10-20分鍾，待細胞團沉降後小心去除舊培養(yang) 基。

• 初次換液可采用“半換液”方法，即保留一半舊培養(yang) 基，補加等量新鮮培養(yang) 基。

NK-92細胞傳代

• 傳(chuan) 代時機: 當NK-92細胞達到對數生長期，且細胞密度在5×10^5至1×10^6 cells/mL之間。

• 傳(chuan) 代步驟:采用沉降法收集NK-92細胞團。用新鮮培養(yang) 基重懸NK-92細胞團，轉移至新的培養(yang) 瓶中。

6. NK-92細胞凍存

• 凍存液: 90% FBS + 10% DMSO。

• 收集NK-92細胞團，重懸於(yu) 凍存液中。

• 將NK-92細胞分裝於(yu) 凍存管中，迅速放入-80°C冰箱中冷凍24小時。

• 之後轉移至液氮中長期保存。

NK-92細胞培養注意事項

• 細胞敏感性: NK-92細胞對機械損傷(shang) 非常敏感，盡量減少離心次數，避免直接倒掉培養(yang) 液。

• 細胞團處理: 在換液和傳(chuan) 代過程中，避免打散NK-92細胞團，以保持細胞活力。

• 監測細胞狀態: 定期觀察NK-92細胞形態，確保細胞團的健康狀態，避免出現死細胞和細胞碎片。

NK-92細胞培養的關鍵措施

優(you) 化IL-2補充:

• 使用高質量的重組IL-2，濃度保持在100-200 U/mL。

• 定期補充新鮮IL-2，建議每周至少2-3次。

采用"沉降法"進行換液和傳(chuan) 代:

• 避免使用離心法，減少對NK-92細胞團的機械損傷(shang) 。

• 靜置10-20分鍾讓NK-92細胞沉降，小心去除上清液，保留細胞團，添加新鮮培養(yang) 基。

控製細胞密度:

• 保持NK-92細胞密度在5×10^5-1×10^6 cells/mL之間。

• 定期觀察細胞團大小，避免細胞團過大導致營養(yang) 不足。

維持適宜的培養(yang) 環境:

• 溫度保持在37°C，CO₂濃度5%。

• 使用高質量的培養(yang) 基和血清。

基因編輯改造:

• 可通過CRISPR/Cas9技術敲除免疫檢查點基因（如CBLB、NKG2A、TIGIT），提高NK-92細胞的適應性和抗腫瘤能力。

減少機械損傷(shang) :

• 避免頻繁離心和過度吹打NK-92細胞。

• 輕柔操作，保持NK-92細胞團完整性。

定期監測細胞狀態:

• 觀察NK-92細胞形態，確保細胞團呈白色透亮狀態。

• 評估NK-92細胞活性和功能，如細胞毒性試驗。