NK-92MI細胞（人惡性非霍奇金淋巴瘤自然殺傷(shang) 細胞）

NK-92MI細胞是一種經過基因修飾的自然殺傷(shang) （NK）細胞株，源自一位50歲患有急進性非霍奇金淋巴瘤的白人男性外周血單核細胞。NK-92MI細胞通過逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體(ti) ，將人白細胞介素-2（IL-2）的cDNA導入原始NK-92細胞中獲得。這一基因修飾使NK-92MI細胞能夠自主合成IL-2，從(cong) 而不依賴外源性IL-2即可生長，這是其與(yu) 親(qin) 本NK-92細胞的主要區別。

NK-92MI細胞呈淋巴母細胞樣形態，懸浮生長並呈聚團狀態。

NK-92MI細胞特性特征

• 細胞係衍生：NK-92MI細胞係通過基因工程手段從(cong) NK-92細胞係衍生而來，具體(ti) 方法為(wei) 利用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體(ti) 將人白細胞介素-2（IL-2）的cDNA導入NK-92細胞中。

• 生長特性：NK-92MI細胞係無需外源性IL-2即可生長，而NK-92細胞係則依賴外源性IL-2。

• 陽性標記：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54、CD56。

• 陰性標記：CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34、HLA-DR。

• 細胞毒性：NK-92MI細胞對多種惡性細胞具有細胞毒性，包括殺死K562細胞和Daudi細胞，且其IL-2合成水平高於(yu) 同源的NK-92CI細胞。

• NK-92和NK-92MI細胞廣泛用於(yu) 免疫學和癌症研究。

• 1998年9月，發現NK-92細胞的一種培養(yang) 物受到支原體(ti) 汙染。通過使用BM-Cycline進行21天的治療，成功清除汙染。六周後，通過赫斯特染色、PCR和標準培養(yang) 試驗檢測，均為(wei) 陰性。

• NK-92細胞係對愛潑斯坦-巴爾病毒DNA序列檢測呈陽性。

NK-92MI細胞參數表

NK-92MI人惡性非霍奇金淋巴瘤自然殺傷細胞培養教程

• 細胞解凍：

• 從(cong) 液氮中取出凍存的NK-92MI細胞，迅速放入37°C的水浴中解凍1-2分鍾。

• 解凍後，將NK-92MI細胞轉移至含有10-12.5% FBS和1% P/S的培養(yang) 基中，輕輕混勻以防止細胞損傷(shang) 。

• 離心和重懸：

• 將NK-92MI細胞懸液轉移至離心管中，以1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清液，加入適量新鮮培養(yang) 基，輕輕重懸NK-92MI細胞沉澱。

• 細胞接種：

• 將重懸的NK-92MI細胞轉移至培養(yang) 瓶中，培養(yang) 基體(ti) 積通常為(wei) 10-20 ml，根據NK-92MI細胞數量和培養(yang) 瓶大小進行調整。

• NK-92MI細胞濃度應保持在2x10^5 - 1x10^6個(ge) /ml之間。

• 培養(yang) 環境：

• 將NK-92MI細胞的培養(yang) 瓶放入37°C，5% CO2的培養(yang) 箱中，保持穩定的培養(yang) 條件。

• 細胞觀察與(yu) 維護：

• 每2-3天檢查NK-92MI細胞狀態，注意觀察是否有細胞聚團現象。

• 如果NK-92MI細胞出現較大細胞團，需輕輕吹打成小團，避免營養(yang) 不足導致NK-92MI細胞死亡。注意操作輕柔，避免過度機械刺激。

• 培養(yang) 基更換：

• 每2-3天更換NK-92MI細胞培養(yang) 基，以提供新鮮營養(yang) 物質並去除代謝廢物。

• 傳(chuan) 代：

• 當NK-92MI細胞生長至70-80%匯合時，進行傳(chuan) 代，通常傳(chuan) 代比例為(wei) 1:3。

• 傳(chuan) 代時，重複離心和重懸步驟，將NK-92MI細胞轉移至新的培養(yang) 瓶中。

注意事項

• 血清要求：NK-92MI細胞對血清質量較為(wei) 敏感，建議使用優(you) 質胎牛血清。

• 溫度敏感：NK-92MI細胞培養(yang) 基和PBS在使用前應複溫至37°C，避免溫度驟變對NK-92MI細胞造成影響。

• 機械刺激：NK-92MI細胞對機械刺激敏感，操作時盡量輕柔，減少吹打次數。

• 凍存：如需凍存NK-92MI細胞，使用含10% DMSO的冷凍保護液。快速冷凍至-80°C後轉移至液氮中保存。

• 細胞狀態：除非實驗需要，通常不建議將NK-92MI細胞完全吹散成單個(ge) 細胞，以維持NK-92MI細胞的良好狀態。