CTLL-2細胞（小鼠T淋巴細胞） （暫不提供）

CTLL-2細胞是一株源自C57BL/6小鼠的細胞毒性T淋巴細胞克隆。CTLL-2細胞依賴於(yu) 白細胞介素-2（IL-2）進行生長，常用於(yu) 測定IL-2的生物活性。

CTLL-2細胞是依賴IL-2的細胞毒性T細胞株，在體(ti) 外培養(yang) 時以懸浮狀態生長，形態上類似於(yu) 淋巴母細胞。CTLL-2細胞在免疫學研究中廣泛應用，尤其是在研究T細胞功能和IL-2相關(guan) 機製方麵。

可以使用含有Con A的T-STIM（來自Becton Dickinson的大鼠IL-2培養(yang) 補充劑）進行培養(yang) ，或者按照產(chan) 品說明製備大鼠生長因子。新鮮製備的大鼠生長因子通常能更有效地促進細胞生長。

大鼠生長因子的製備方法：

• 從(cong) 體(ti) 重約200克的雌性Sprague-Dawley大鼠中取出脾髒。

• 將脾髒粗碎後通過60號篩。

• 用RPMI 1640培養(yang) 基洗滌細胞2-3次。

• 將細胞重新懸浮在含有1%熱滅活胎牛血清、0.05 mM 2-巰基乙醇、15 mM HEPES、100單位/ml青黴素、100 mg/ml鏈黴素和1.0µg/ml刀豆球蛋白A的RPMI 1640培養(yang) 基中，濃度為(wei) 1-1.5 x 10^6個(ge) 活細胞/ml。

• 在37°C的CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 48小時。

• 在4°C下以16000 x g離心10分鍾，收獲上清液並用0.22微米的膜進行過濾消毒。

• 將生長因子儲(chu) 存於(yu) -60°C，避免凍融循環。大鼠生長因子在4°C下可保存一個(ge) 月，並保持其活性。使用前將其添加到培養(yang) 基中。

• 通常，每個(ge) 脾髒可產(chan) 生100-200 ml的大鼠生長因子，預計每個(ge) 脾髒有1-2 x 10^8個(ge) 細胞。

CTLL-2細胞特性特征

• CTLL-2細胞依賴白細胞介素-2（IL-2）生長

• CTLL-2細胞具有細胞毒性作用、對某些病毒和腫瘤細胞有殺傷(shang) 作用

• CTLL-2細胞表達白細胞介素2（IL-2）受體(ti)
  

• CTLL-2細胞鼠痘病毒檢測呈陰性

CTLL-2細胞參數表

CTLL-2小鼠T淋巴細胞培養教程

細胞複蘇

• 收到凍存的CTLL-2細胞後，立即轉入液氮儲(chu) 存或直接複蘇。
  

• 複蘇後，將CTLL-2細胞置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中4-6小時，以穩定細胞狀態。

• 複蘇的第一、二天CTLL-2細胞死亡率可能較高，通常在第四天恢複正常。

• 注意事項：CTLL-2細胞凍存後再複蘇需要2周左右時間調整狀態，期間細胞碎片較多。

傳代培養

• 傳(chuan) 代密度：CTLL-2細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• 傳(chuan) 代比例：建議1:2傳(chuan) 代（即1個(ge) T25瓶傳(chuan) 至2個(ge) T25瓶或2個(ge) 6cm培養(yang) 皿）。

• 收集CTLL-2細胞。

• 1000 RPM 離心3-5分鍾。

• 棄去上清液。

• 添加1-2 ml新鮮培養(yang) 液後輕輕吹打混勻。

• 傳(chuan) 代頻率：建議每周傳(chuan) 代3次，如周一、三、五。

• 接種密度：周一：0.02 M/ml、周三：0.02 M/ml、周五：0.015 M/ml

特別注意事項

• IL-2 添加：實驗室常備 IL-2，發現CTLL-2細胞狀態不好時（如散在細胞變多、細胞不生長），以100 U/ml濃度添加 IL-2，培養(yang) 2-3天後CTLL-2細胞狀態會(hui) 改善。

• 細胞密度：需及時傳(chuan) 代，CTLL-2細胞密度超過0.5 M/ml後，24小時內(nei) 細胞會(hui) 大量死亡。

• 培養(yang) 時間：CTLL-2細胞的最長培養(yang) 時間為(wei) 4個(ge) 月，約傳(chuan) 代50次。

• 凍存密度：應達到6-10 M/管。

細胞觀察

• 定期使用倒置顯微鏡觀察CTLL-2細胞形態和生長狀況。

• 細胞形態：CTLL-2細胞呈淋巴母細胞樣，懸浮生長。

汙染預防

• 嚴(yan) 格無菌操作，定期檢查CTLL-2細胞是否有汙染。

• 如發現汙染，立即隔離並處理受汙染的CTLL-2細胞。

細胞凍存

• 凍存液：使用90% FBS + 10% DMSO。

• 步驟：將CTLL-2細胞懸浮在凍存液中，緩慢降溫後轉入液氮中長期保存。