Het-1A細胞（人食道正常細胞）

HET1A細胞係是1986年從(cong) 一名25歲男性的正常食管屍檢組織中分離建立。HET1A細胞係通過質粒pRSV-T進行轉染，質粒含有RSV-LTR啟動子和猿猴病毒40（SV40）大T抗原編碼序列，賦予細胞持續的增殖能力。
HET1A細胞上皮樣細胞具有貼壁生長特性，並在鈣的刺激下活化，但會(hui) 受到胎牛血清和轉化生長因子-β1、β2的抑製。研究發現，伏馬菌素 B1 抑製 HET-1A 細胞的生長並誘導細胞凋亡，而合成類視黃醇 CD437 則通過 caspase-3 依賴途徑誘導凋亡。
HET1A 細胞的核型為(wei) 亞(ya) 二倍體(ti) （34-40 條染色體(ti) ），是研究食管致癌物效應的有力模型。

Het-1A人食道正常細胞特性特征

• 基因表達：HET1A細胞係能夠表達細胞角蛋白，表明其上皮細胞的特性；SV40大T抗原的表達為(wei) 研究其致瘤性提供了基礎。

• 生長因子反應：Het1A細胞對鈣刺激敏感，並受胎牛血清、轉化生長因子-β1和轉化生長因子-β2的抑製。

• 藥物反應：伏馬菌素B1能夠抑製該細胞的生長並誘導細胞凋亡。合成類視黃醇CD437通過caspase-3依賴途徑誘導細胞凋亡，顯示出其在研究食道癌治療中的潛力

Het-1A細胞參數表

Het-1A人食道正常細胞培養教程

細胞複蘇步驟

• 配置完全培養(yang) 基，包括基礎培養(yang) 基（如BEBM或DMEM）加10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S）。將5 mL完全培養(yang) 基加入15 mL離心管中，置於(yu) 37℃水浴預熱，確保為(wei) Het1A細胞複蘇提供適宜的環境。

• 從(cong) 液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存的Het1A細胞，立即放入37℃水浴中解凍，輕輕搖動凍存管，加速Het1A細胞的解凍過程，約1分鍾後迅速取出。

• 將解凍後的Het1A細胞懸液轉移至含有預熱完全培養(yang) 基的離心管中，以1000 rpm離心5分鍾，去除上清。用2 mL完全培養(yang) 基輕輕重懸Het1A細胞沉澱。

• 將重懸後的Het1A細胞加入到T25培養(yang) 瓶中，補充適量培養(yang) 基（約8 mL），貼上標簽後將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中，靜置過夜，以確保Het1A細胞順利貼壁生長。

Het1A細胞傳代步驟

• 每2至3天觀察Het1A細胞的生長狀態，待細胞達到80%-90%的融合度時，準備進行傳(chuan) 代操作。

• 棄去培養(yang) 上清，使用無鈣、鎂離子的PBS緩衝(chong) 液輕輕衝(chong) 洗Het1A細胞1-2次。然後加入適量0.25%胰酶，消化Het1A細胞2-5分鍾，觀察細胞開始從(cong) 培養(yang) 瓶表麵脫落。加入等體(ti) 積完全培養(yang) 基中和胰酶，輕輕吹打Het1A細胞，使其懸浮均勻。

• 在1000 rpm下離心5分鍾，去除上清，重懸Het1A細胞，並按1:2至1:4的比例分裝到新的培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基，放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中，繼續培養(yang) Het1A細胞。

Het1A細胞凍存步驟

• 配製適合Het1A細胞的凍存液，基礎培養(yang) 基中加入10%二甲基亞(ya) 碸（DMSO）和20%胎牛血清。

• 按照傳(chuan) 代步驟收集Het1A細胞後，重懸並將細胞按1×10^6 cells/mL的密度分裝到凍存管中。

• 將裝有Het1A細胞的凍存管置於(yu) -80℃冰箱中冷凍24小時後，再轉移至液氮罐中長期保存。

培養注意事項

• Het1A細胞貼壁較為(wei) 鬆散，操作時應格外小心，避免機械性損傷(shang) 或細胞脫落。

• 收到Het1A細胞後，使用75%酒精消毒培養(yang) 瓶外表麵，並在37℃培養(yang) 箱中靜置2-4小時，待細胞穩定後再進行傳(chuan) 代或其他實驗操作。

• 建議在Het1A細胞解凍後使用新配置的完全培養(yang) 基，避免使用運輸過程中的培養(yang) 基，以確保細胞狀態最佳。