KYSE450細胞（人食管鱗狀細胞癌細胞）

KYSE450細胞係源自一位59歲日本男性患者的胸內(nei) 食管組織，患者在治療前被確診為(wei) 高分化的浸潤性食管鱗狀細胞癌。此癌症的浸潤深度未超過粘膜下層，代表腫瘤處於(yu) 相對早期階段。KYSE450細胞係由日本京都大學的研究團隊於(yu) 20世紀90年代建立，攜帶p53基因突變和MYC癌基因擴增，這些分子特征與(yu) 食管鱗癌的發生和發展息息相關(guan) 。

KYSE450細胞表現出典型的上皮樣形態，在體(ti) 外實驗中具有優(you) 良的生長能力。廣泛應用於(yu) 食管癌的基礎生物學研究和藥物篩選，能夠較好地模擬人類食管鱗癌的生物學行為(wei) ，成為(wei) 食管癌研究的重要模型。

KYSE450細胞特性特征

• 基因突變：KYSE450細胞係攜帶p53基因的突變。
  

• 癌基因擴增：KYSE450細胞係還表現出MYC癌基因的擴增，MYC是一個(ge) 重要的原癌基因，與(yu) 細胞增殖和代謝調控相關(guan) 。

• 細胞表型：KYSE450細胞在體(ti) 外實驗中顯示出典型的食管鱗狀細胞特征，這使其成為(wei) 研究食管癌生物學的重要模型。

• 無菌檢測：KYSE450細胞係在無菌檢測中顯示為(wei) 陰性，包括對細菌、酵母和支原體(ti) 的檢測

KYSE450細胞參數表

KYSE450人食管鱗狀細胞癌細胞培養教程

KYSE450細胞複蘇

• 準備含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養(yang) 基，並提前加熱至37℃。
  

• 準備無菌離心管和水浴鍋，水浴溫度設為(wei) 37℃。

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的KYSE450細胞管，迅速放入37℃的水浴中，並輕輕晃動管子，快速解凍。
  

• 當KYSE450細胞懸液約90%融化時，立即取出細胞管，用75%酒精消毒管外表麵後，在無菌條件下轉移至無菌離心管中。

• 加入4-5 mL預熱的RPMI 1640培養(yang) 基，輕輕混勻。
  

• 以1000 rpm離心3分鍾，去除上清液，避免殘留的DMSO對KYSE450細胞產(chan) 生毒性。

• 以1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸KYSE450細胞，輕輕吹打使細胞分散。
  

• 將KYSE450細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶或10 cm培養(yang) 皿中，添加適量的培養(yang) 基，並置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中孵育。

KYSE450細胞傳代

• 當KYSE450細胞長滿培養(yang) 瓶底部的80%-90%時，準備進行傳(chuan) 代操作。
  

• 棄去培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 液）洗滌KYSE450細胞1-2次，以去除殘留的血清。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA），確保液體(ti) 均勻覆蓋KYSE450細胞表麵。
  

• 在37℃培養(yang) 箱中消化約1分鍾，觀察KYSE450細胞是否變圓且脫落，輕敲培養(yang) 瓶幫助細胞完全脫落。

• 加入5-8 mL培養(yang) 基終止消化，輕輕混勻後轉移至無菌離心管中，以1000 rpm離心4分鍾。
  

• 棄去上清液，加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸KYSE450細胞。

• 將重懸後的KYSE450細胞按1:2至1:3的比例分至新的T25培養(yang) 瓶中，加入新鮮的RPMI 1640培養(yang) 基。
  

• 放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

KYSE450細胞凍存

• 當KYSE450細胞狀態良好且生長至80%-90%融合時，收集培養(yang) 瓶中的細胞，將其轉移至無菌離心管。
  

• 以PBS洗滌KYSE450細胞一次，去除培養(yang) 基中的血清成分。
  

• 使用細胞計數儀(yi) 或血球計數板進行KYSE450細胞計數，調整細胞濃度至5×10^6至1×10^7/mL。
  

• 配製凍存液（55% RPMI 1640基礎培養(yang) 基，40%胎牛血清，5% DMSO），混勻後加入KYSE450細胞懸液。

• 每支凍存管加入1 mL KYSE450細胞懸液，做好標識。
  

• 將凍存管放置在程序性降溫盒中，置於(yu) -80℃冷凍24小時後轉移至液氮中長期保存。