KYSE410細胞 (人食管鱗癌細胞)

KYSE410細胞係是從(cong) 一名51歲日本男性在治療前因頸部食管切除的低分化侵襲性食管鱗狀細胞癌（腫瘤明顯侵入外膜）中建立。

KYSE410細胞係特征

• 過表達基因：過表達肝素結合生長因子（hst-1）和細胞周期蛋白D1。

• Y染色體(ti) ：通過短串聯重複序列（STR）-PCR分析，無法檢測到Y染色體(ti) 。這可能是SSC細胞係丟(diu) 失Y染色體(ti) 的已知現象。

• 細胞倍增時間：KYSE-410細胞的倍增時間為(wei) 32-45小時。

• 支原體(ti) 檢測：初始汙染通過環丙沙星（Ciprobay）消除，並在DAPI、微生物培養(yang) 、RNA雜交和PCR檢測中連續呈陰性。

• 病毒檢測：ELISA檢測逆轉錄酶為(wei) 陰性，PCR檢測結果均為(wei) 陰性，包括EBV、HBV、HCV、HHV-8、HIV-1、HIV-2、HPV、HTLV-1/2、MLV、SMRV。

• 文獻描述：KYSE410細胞係攜帶TP53和KRAS突變。

KYSE410細胞參數表

KYSE410人食管鱗癌細胞培養教程

KYSE-410細胞複蘇

• 將含有1mL KYSE-410細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍。
  

• 將解凍後的細胞懸液加入4-6mL培養(yang) 基中混合均勻。

• 在1000RPM條件下離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 用1-2mL培養(yang) 基重懸KYSE-410細胞，輕輕吹勻。

• 將細胞懸液加入培養(yang) 瓶或10cm培養(yang) 皿中，培養(yang) 過夜。

• 第二天換液並檢查KYSE-410細胞密度。

KYSE-410細胞傳代

• 當KYSE-410細胞密度達80%-90%時，可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗KYSE-410細胞1-2次。
  

• 加入0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。

• 在顯微鏡下觀察KYSE-410細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4mL含10% FBS的培養(yang) 基終止消化。

• 輕輕打勻後吸出KYSE-410細胞懸液，在1000RPM條件下離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 用1-2mL培養(yang) 基重懸KYSE-410細胞，輕輕吹勻。

• 按1:2至1:5的比例分裝到新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，加入6-8mL完全培養(yang) 基以保持KYSE-410細胞的生長活力。

• 後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2至1:5的比例進行。

KYSE-410細胞凍存

• 傳(chuan) 代時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的KYSE-410細胞到離心管中。
  

• 使用血球計數板計數，決(jue) 定KYSE-410細胞的凍存密度（推薦凍存密度為(wei) 1×10⁶~1×10⁷個(ge) 活細胞/mL）。

• 在1000RPM條件下離心3-5分鍾，去掉上清。

• 用配製好的細胞凍存液（90% 完全培養(yang) 基 + 10% DMSO）重懸KYSE-410細胞。

• 按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(ge) 活細胞/mL分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，在-80℃冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。

• 記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。