DLD-1細胞（人結直腸腺癌上皮細胞）

DLD-1細胞源自結直腸腺癌的假二倍體(ti) 人類細胞係，最初從(cong) 一名結腸腺癌患者的大腸組織中分離獲得，常用於(yu) 癌症研究，特別是在轉染實驗中作為(wei) 合適的宿主。

DLD-1細胞係具有46條染色體(ti) 的模式核型，其中86%的細胞保持這一核型。多倍體(ti) 細胞的比例約為(wei) 17.1%。其核型特征包括46, XY, -2, +dir dup(2)(p13-p23)，其中Y染色體(ti) 相對於(yu) N22染色體(ti) 稍長，並在遠端q臂存在明顯的異色熒光區。

DLD-1細胞是已被鑒定為(wei) 來源於(yu) 單個(ge) 個(ge) 體(ti) 的四種結直腸腺癌細胞係之一。DNA圖譜研究表明，DLD-1xb、HCT-15細胞、HCT-8細胞和HRT-18G細胞共享一個(ge) 圖譜。

DLD-1細胞特性特征

• 致瘤性：DLD-1細胞在裸小鼠中進行皮下接種（10^7個(ge) 細胞），21天內(nei) 100%（5/5）出現腫瘤，顯示出良好的致瘤性。

• 癌基因表達：DLD-1細胞對多種癌基因呈陽性反應，myc+；myb+；ras+；fos+；sis+；abl-；ros；src-。p53抗原表達呈陽性，且其突變形式為(wei) C→T點突變，導致241位的Ser→Phe變化。

• 抗原表達：DLD-1細胞表達O型血抗原，對角蛋白和波形蛋白呈弱陽性反應，角蛋白免疫過氧化物酶染色結果為(wei) 陽性。

• 基因表達：該細胞係中癌胚抗原（CEA）表達為(wei) 0.5 ng/10^6個(ge) 細胞/10天，結腸抗原3表達。

• 同工酶特征：DLD-1細胞的同工酶譜包括ES-D（1-2）、G6PD（B）、PEP-D（1）、PGD（A）、PGM1（1）和PGM3（1）。

• 細胞遺傳(chuan) 學：DLD-1細胞與(yu) HCT-15細胞在DNA指紋鑒定和染色體(ti) 組型分析中顯示出相似性，表明它們(men) 可能源自同一患者的不同克隆。盡管遺傳(chuan) 起源得到證實，但它們(men) 在染色體(ti) 標記上並無一致性改變。
  

• 汙染與(yu) 處理：1979年DLD-1細胞曾被豬鼻支原體(ti) 汙染，經過12周的抗生素聯合培養(yang) 處理後，細胞檢測結果在連續11個(ge) 月的無抗生素培養(yang) 中均為(wei) 陰性

DLD-1人結直腸腺癌上皮細胞參數表

DLD-1人結直腸腺癌上皮細胞培養教程

DLD1細胞複蘇

• 將水浴鍋預熱至37℃，準備用於(yu) 複蘇DLD1細胞的完全培養(yang) 基（RPMI-1640，補充10%胎牛血清和1%青黴素/鏈黴素）。
  

• 從(cong) 液氮中取出冷凍的DLD1細胞管，迅速放入37℃的水浴中，輕輕搖動1-2分鍾，直至DLD1細胞完全融化。
  

• 將融化後的DLD1細胞迅速轉移至無菌的15 mL離心管中，並加入9 mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕混勻。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 用1-2 mL的完全培養(yang) 基重懸DLD1細胞，並將細胞懸液轉移至T-25培養(yang) 瓶中。
  

• 將培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中孵育2-3小時，以使DLD1細胞恢複並貼壁。

DLD1細胞培養

• 培養(yang) 基：RPMI-1640培養(yang) 基，補充10%胎牛血清和1%青黴素/鏈黴素，用於(yu) DLD1細胞的培養(yang) 。

• 培養(yang) 條件：在37℃、5% CO₂、95%濕度的條件下培養(yang) DLD1細胞。

• 換液頻率：每2-3天更換一次培養(yang) 基，以確保DLD1細胞的培養(yang) 環境清潔並支持其健康生長。

• DLD1細胞觀察：定期顯微鏡下觀察DLD1細胞的形態和生長狀態，確認DLD1細胞無汙染，生長狀況良好。

DLD1細胞傳代

• 當DLD1細胞達到80-90%的融合度時，應進行傳(chuan) 代，以避免DLD1細胞過度擁擠。
  

• 取出DLD1細胞培養(yang) 瓶，棄去培養(yang) 基，加入1-2 mL 0.25%胰酶溶液，覆蓋DLD1細胞，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化2-3分鍾，直至DLD1細胞變圓且開始脫落。
  

• 輕輕敲擊培養(yang) 瓶底部，確保所有DLD1細胞均已脫離瓶壁。

• 加入等體(ti) 積的完全培養(yang) 基中和胰酶，輕輕混勻DLD1細胞懸液。
  

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。
  

• 將DLD1細胞用適量的完全培養(yang) 基重懸。

• 按1:3至1:4的比例將DLD1細胞懸液分裝至新的培養(yang) 瓶中，添加適量的完全培養(yang) 基。
  

• 將新培養(yang) 瓶置於(yu) 培養(yang) 箱中，繼續培養(yang) DLD1細胞。

DLD1細胞凍存

• 配製DLD1細胞的凍存液，成分為(wei) ：55%完全培養(yang) 基、40%胎牛血清和5%二甲基亞(ya) 碸（DMSO）。
  

• 將DLD1細胞以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。
  

• 將DLD1細胞重懸在預先準備好的凍存液中，混勻。
  

• 將重懸好的DLD1細胞分裝至凍存管中，並清晰標記DLD1細胞類型、傳(chuan) 代次數及凍存日期。
  

• 將凍存管先置於(yu) -80℃冰箱中過夜，隨後移入液氮罐中長期保存DLD1細胞。
  

注意事項

• DLD1細胞的凍存和複蘇過程應嚴(yan) 格保持無菌操作，以避免細胞汙染。

• 培養(yang) DLD1細胞的培養(yang) 基使用前需新鮮配製，已用於(yu) 細胞複蘇或培養(yang) 的培養(yang) 基不應再次使用。

• 定期監測DLD1細胞狀態，確保其無汙染並生長良好。