SW480(L15) 人結腸癌細胞

SW480細胞是一種源自50歲白人男性患者的原位直腸腺癌的腫瘤細胞係。該細胞係於(yu) 1978年11月由A·Leibovitz提交至ATCC，當時已傳(chuan) 代至第91代。

此細胞係攜帶有多個(ge) 突變，其中包括p53基因的G→A和C→T突變，以及Kras基因的第12位密碼子的錯義(yi) 突變。

SW480細胞表達多個(ge) 癌基因，包括c-Myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos。此外，細胞表達角蛋白，但不表達細胞溶解酶和Matrilysin。SW480細胞的幹細胞染色體(ti) 數目為(wei) 亞(ya) 三倍體(ti) ，常見11-12條標記染色體(ti) 。在所檢查的每個(ge) 中期的8%中觀察到雙分鍾和雙心室。該細胞對裸鼠有致瘤性。

SW480細胞攜帶有多種突變，包括p53基因和Kras基因的突變。p53基因是一個(ge) 重要的抑癌基因，而Kras基因突變與(yu) 多種癌症類型，包括結直腸癌，密切相關(guan)

基因表達：癌胚抗原（CEA）0.7ng/106個(ge) 細胞/10天；角蛋白；轉化生長因子β；myc+；myb+；ras+；fos+；sis+；p53+；abl-；ros；src-；HLA：（A2；B8；B17）；血型A；Rh+；免疫過氧化物酶染色角蛋白陽性；c-myc；K-ras；H-ras；N-ras；myb；sis；fos。

該細胞係在CSAp（CSAp-）和結腸抗原3方麵呈陰性反應。通過免疫過氧化物酶染色，細胞對角蛋白呈陽性反應。在p53基因的273號密碼子中，發現了一個(ge) G->A突變，導致Arg->His的置換，同時在309號密碼子中發現了C->T突變，導致Pro->Ser的置換。細胞表達的p53蛋白水平上升。該細胞係對c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos癌基因表達呈陽性反應。未檢測到N-myc癌基因的表達。有報道顯示，這些細胞可以產(chan) 生GM-CSF（粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子）。

SW480(L15) 人結腸癌細胞參數表

一、細胞複蘇（原則 緩凍速溶）：

1. 準備37℃水浴。

2. 從(cong) 液氮中取出細胞。

3. 迅速置於(yu) 37℃水浴中，1分鍾內(nei) 融化。

4. 打開培養(yang) 基瓶蓋（開蓋前用酒精棉擦拭蓋口邊緣），瓶蓋放在“非工作區”以免汙染。

   向離心管中加入10ml新鮮培養(yang) 基。
   

   用酒精棉擦拭凍存管。
   

5. 開蓋，將管內(nei) 液吸入含10ml新鮮培養(yang) 基的培養(yang) 皿（瓶），搖勻，離心5min後新鮮培養(yang) 基重懸。

6. 將細胞放入CO2培養(yang) 箱培養(yang) ，24-48小時後換液。

二、貼壁細胞的傳代培養：

1. 打開培養(yang) 皿（瓶）蓋，傾(qing) 斜吸出所有培養(yang) 基。

2. 加入2mlPBS洗滌，傾(qing) 斜吸出PBS。

3. 加入0.5ml-1ml胰酶溶液，混勻。

4. 在37℃消化1-2分鍾，觀察細胞變圓。

5. 用吸管加入約4ml完全培養(yang) 基，用吸管將細胞吹打下來，離心培養(yang) 基重懸。

6. 將細胞懸液分配至新的培養(yang) 瓶（皿）中，再用移液管加入5-8ml新鮮的培養(yang) 基，蓋蓋。

   關(guan) 閉工作台。
   

三、細胞凍存：

1. 取貼壁細胞的傳(chuan) 代培養(yang) 中的消化離心操作，離心前吸出微量懸液用於(yu) 計數。

2. 用移液管加入適量凍存液，用吸管移入2ml凍存管（1ml/管），標記凍存管。

3. 進行梯度降溫。

4. 12－24小時後放入液氮，記錄。

注意事項：

• 該細胞適用於(yu) L-15空氣培養(yang) 基，培養(yang) 時要保持空氣培養(yang) 狀態，避免通入二氧化碳。

• 建議使用我方提供的SW480細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基，已添加血清和雙抗等成分，可直接用於(yu) 培養(yang) SW480細胞。

• 進行無菌操作時，確保接觸細胞的任何物品都是滅菌的。

• 在培養(yang) 細胞前，了解細胞的培養(yang) 條件，包括培養(yang) 基組成和添加物。

• 盡量使用無菌一次性耗材，不同時操作多種細胞係，確保細胞的純度和生長狀態。