shp77細胞（人小細胞肺癌細胞係）

SHP-77細胞係來源於(yu) 1977年一名54歲白人男性的左肺上葉頂端的非包膜原發性肺腫瘤。shp77細胞係從(cong) 小細胞肺癌組織中分離出來，保留了小細胞肺癌的關(guan) 鍵特征，同時具有未分化大細胞變體(ti) 的形態。SHP-77細胞呈上皮細胞形態，主要表現為(wei) 圓形或橢圓形，具備一定的貼壁生長特性，但也能以懸浮方式生長。SHP-77細胞具有腺體(ti) 形成和胞漿內(nei) 板層體(ti) 的存在，進一步體(ti) 現其神經內(nei) 分泌特征。

shp77細胞特征特性

• shp77細胞保留了小細胞肺癌的典型特征，具有穩定的生物化學特性，可連續培養(yang) ，是小細胞肺癌中一種不常見的未分化大細胞突變體(ti)

• shp77細胞具有成瘤性，能在無胸腺裸鼠和M-NSG小鼠體(ti) 內(nei) 形成局限性結節腫瘤，無轉移證據

• 神經內(nei) 分泌特征：表達神經內(nei) 分泌標記物L-多巴脫羧酶；具有致密核心分泌顆粒（dense core secretory granules）；

• 抗原表達：血型：O型血，Rh+；表達CD56和CD57（HNK-1，Leu-7）

• 基因表達：表達神經細胞粘附分子NKH-1

• shp77細胞可作為(wei) 51Cr和111In釋放細胞毒性測定的體(ti) 外靶點，shp77細胞用於(yu) 評估癌症患者細胞和血清的免疫反應性

• shp77細胞適用於(yu) 評估接受放療或化療的小細胞肺癌患者的免疫狀態

shp77細胞參數表

shp77人小細胞肺癌細胞係培養教程

SHP-77細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中快速取出凍存的SHP-77細胞，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動凍存管，使SHP-77細胞在1-2分鍾內(nei) 完全解凍。

• 解凍後，用75%酒精消毒凍存管外表麵。

• 將SHP-77細胞懸液轉移到15 ml離心管中，加入5 ml預熱的完全培養(yang) 基（RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S）。

• 以1000 rpm離心5分鍾，去除上清液。

• 用新鮮的完全培養(yang) 基懸浮SHP-77細胞沉澱，並將其轉移到培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) SHP-77細胞。

SHP-77細胞傳代

• 每天觀察SHP-77細胞的生長狀態，當SHP-77細胞密度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

• 去除舊培養(yang) 基，並用無鈣鎂的PBS洗滌SHP-77細胞。

• 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液（1-2 ml），在37℃下孵育2-5分鍾，輕敲培養(yang) 瓶底部，直至SHP-77細胞脫落。

• 加入5-10 ml完全培養(yang) 基中和胰蛋白酶，輕輕吹打SHP-77細胞使其完全懸浮。

• 將細胞懸液轉移到15 ml離心管中，以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 用完全培養(yang) 基重新懸浮SHP-77細胞，並按1:2到1:3的比例進行傳(chuan) 代。

SHP-77細胞凍存

• 傳(chuan) 代前一天，確保SHP-77細胞處於(yu) 對數生長期。

• 按照傳(chuan) 代步驟收集SHP-77細胞，並以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 用預冷的凍存液重新懸浮SHP-77細胞，調整細胞密度為(wei) 1x10^6細胞/ml。

• 將SHP-77細胞懸液分裝到凍存管中，每管1 ml。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，在-80℃凍存過夜。

• 次日將凍存管轉移到液氮中長期保存SHP-77細胞。

培養過程中的注意細節

• 培養(yang) 基選擇：使用RPMI-1640培養(yang) 基，添加10%胎牛血清和1%青黴素-鏈黴素，適合SHP-77細胞生長。

• 培養(yang) 條件：保持37℃，5% CO2，95%空氣的培養(yang) 環境，以維持SHP-77細胞的正常生長。

• 生長方式：SHP-77細胞是混合生長方式，包括懸浮和貼壁細胞。因此，傳(chuan) 代時需要注意收集兩(liang) 種SHP-77細胞。

• 傳(chuan) 代頻率：根據SHP-77細胞生長狀態，通常每4-6天進行一次傳(chuan) 代。

• 無菌操作：嚴(yan) 格遵守無菌操作規程，避免SHP-77細胞汙染。

• 細胞密度：保持適當的SHP-77細胞密度，避免過度生長或密度過低。

• 定期觀察：每天觀察SHP-77細胞形態和生長狀態，及時發現問題。

常見問題和解決方案

• 細胞生長緩慢：可能由於(yu) 培養(yang) 基營養(yang) 不足、細胞密度過低或培養(yang) 條件不適。解決(jue) 方法包括更換新鮮培養(yang) 基、調整SHP-77細胞密度和檢查培養(yang) 環境。

• 細胞汙染：常見汙染包括細菌或真菌。預防措施包括嚴(yan) 格無菌操作和定期更換抗生素。一旦發現汙染，應立即丟(diu) 棄受汙染的SHP-77細胞。

• 細胞形態異常：可能是傳(chuan) 代次數過多、培養(yang) 條件不適或細胞應激導致。解決(jue) 方法包括使用低代次SHP-77細胞、優(you) 化培養(yang) 條件和減少細胞應激。

• 貼壁細胞比例變化：由於(yu) SHP-77細胞是混合生長方式，傳(chuan) 代時應保持貼壁和懸浮SHP-77細胞的平衡。

• 細胞凍存和複蘇問題：可能出現細胞存活率低的問題。確保使用正確的凍存液配方（95%完全培養(yang) 基，5%DMSO）和適當的凍存、複蘇程序。

• STR位點變異：長期培養(yang) 可能導致STR位點發生變化。定期進行STR鑒定以確保SHP-77細胞係的一致性和可靠性。