CTX-TNA2細胞（大鼠腦I型星形膠質細胞）

CTX-TNA2細胞係是一種源自1日齡Sprague-Dawley大鼠腦額葉皮層組織的I型星形膠質細胞，廣泛應用於(yu) 神經科學及生物醫學研究，尤其適用於(yu) 神經係統相關(guan) 的基礎研究和藥物篩選。CTXTNA2細胞建立過程中，首先對額葉皮層組織中的I型星形膠質細胞進行原代培養(yang) ；在培養(yang) 3天後，使用含有鼠磷酸甘油酸激酶基因啟動子的構建體(ti) 和人GFAP啟動子（pGFA-SV-Tt）及pPGK-neo構建體(ti) 進行轉染，引入帶有SV40早期致癌基因的DNA。隨後，通過加入G418抗生素篩選出轉染成功的細胞群體(ti) ，並進行克隆，最終獲得穩定的細胞係。CTXTNA2細胞係具有高度特異性，來源明確，其在大鼠神經功能研究和疾病模型構建中具有重要價(jia) 值。

CTX-TNA2細胞特性特征

• 來源：CTXTNA2細胞來源於(yu) 1日齡Sprague-Dawley大鼠的腦額葉皮層組織中的I型星形膠質細胞。

• 轉染特征：在構建過程中使用了含有鼠磷酸甘油酸激酶基因啟動子的構建體(ti) ，以及人GFAP啟動子（pGFA-SV-Tt）和SV40致癌基因。轉染後用G418進行篩選。

• 免疫反應性：約20%的細胞對膠質纖維酸性蛋白（GFAP）呈陽性反應，表明其為(wei) I型星形膠質細胞。

• CTXTNA2細胞產(chan) 生的α2巨球蛋白的量與(yu) 原代星形膠質細胞相似，但轉鐵蛋白的產(chan) 生量較少。
  

• CTXTNA2細胞不產(chan) 生腦啡肽原A，也不表達2型星形膠質細胞的O4或A2B5表位。

• 通過免疫染色，95%以上的細胞核中可檢測到SV40 T抗原。

• 致瘤性：CTXTNA2細胞在免疫抑製小鼠中未表現出致瘤性，但能夠在半固體(ti) 培養(yang) 基中形成克隆

CTX-TNA2細胞參數表

CTX-TNA2大鼠腦I型星形膠質細胞培養教程

培養基和凍存液的準備

• 使用DMEM作為(wei) 基礎培養(yang) 基（推薦型號為(wei) iCell-0001），並加入10%的胎牛血清和1%的青黴素-鏈黴素雙抗，以製備適合CTXTNA2細胞的完全培養(yang) 基。
  

• 為(wei) 了促進CTXTNA2細胞的正常生長，培養(yang) 環境需設置為(wei) 37℃，氣相為(wei) 空氣95%和5% CO₂的平衡，濕度保持在70%-80%。
  

• 為(wei) 了長期保存CTXTNA2細胞，凍存液采用90%胎牛血清與(yu) 10% DMSO，推薦在凍存前現配現用，以確保細胞的高存活率。
  

CTXTNA2細胞複蘇

• 將凍存的CTXTNA2細胞置於(yu) 37℃水浴中快速解凍，並迅速搖晃至完全融化。
  

• 解凍後，將CTXTNA2細胞懸液轉移至含4-6 mL完全培養(yang) 基的離心管中，輕輕混合均勻。

• 在1000 RPM下離心3-5分鍾，棄去上清液，以獲得純淨的CTXTNA2細胞沉澱。
  

• 用新鮮的完全培養(yang) 基重懸CTXTNA2細胞，並將其轉移至含6-8 mL培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。
  

• 第二天顯微鏡下觀察CTXTNA2細胞的貼壁情況和生長密度，以確保複蘇後的細胞狀態良好。
  

CTXTNA2細胞傳代

• 當CTXTNA2細胞生長密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代，以保持細胞的增殖活性。
  

• 棄去CTXTNA2細胞的培養(yang) 上清，用無鈣鎂離子的PBS洗滌1-2次。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA（T25瓶使用1-2 mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。

• 當CTXTNA2細胞大部分變圓並脫落時，立即加入3-4 mL含10% FBS的培養(yang) 基終止消化。

• 將消化後的CTXTNA2細胞懸液在1000 RPM下離心3-5分鍾，棄去上清。
  

• 重懸後按1:2的比例分裝至新T25瓶中，加入6-8 mL新鮮培養(yang) 基。

CTXTNA2細胞凍存

• 收集傳(chuan) 代過程中消化好的CTXTNA2細胞至離心管中，計數後確保凍存密度為(wei) 1×10⁶至1×10⁷個(ge) 活細胞/mL。
  

• 在1000 RPM離心3-5分鍾，去掉上清液。
  

• 用配製好的凍存液重懸CTXTNA2細胞，按每1 mL凍存液含1×10⁶至1×10⁷個(ge) CTXTNA2細胞的比例分裝至凍存管中。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，先在-80℃冰箱中保存一夜，再轉入液氮中長期儲(chu) 存，以確保CTXTNA2細胞的凍存效果。