C33A細胞（人宮頸癌細胞係）

C33A細胞是由N·Auersperg從(cong) 宮頸癌切片中建立的細胞係，最初來源於(yu) 一名66歲的白人子宮頸癌患者的宮頸上皮細胞。C33A細胞具有致瘤性。
C33A細胞展示出假二倍體(ti) 核型和上皮細胞形態，但隨著連續傳(chuan) 代，其核型顯示出不穩定性。

C-33A細胞表達視網膜母細胞瘤蛋白（pRB），然而pRB的大小異常。重要的是，細胞中的p53基因表達上調，並且在密碼子273處存在點突變，導致Arg→Cys的替換。此外，C-33A細胞對人乳頭瘤病毒DNA和RNA呈陰性。這些特征使得C-33A細胞在癌症研究中特別有用，包括用於(yu) 細胞3D培養(yang) 和癌症相關(guan) 機製的研究。

C-33A細胞是一個(ge) 假二倍體(ti) 的人類細胞係，模式染色體(ti) 數為(wei) 46，出現在70%的檢測細胞中。多倍體(ti) 細胞占8.6%。每個(ge) 假二倍體(ti) 細胞一致檢測到7條標記染色體(ti) 。它們(men) 是：t（1q17q）、t（1p21q）、del（18）（q21.3）、der（1）t（1；17）（p16；q21.3。還發現了其他幾種標記物，但在分析的15個(ge) 中期中僅(jin) 出現一次。未檢測到DM和HSR。結構正常的N1缺失。通常每個(ge) 細胞中有兩(liang) 條X染色體(ti) 。

基因表達：p53+；pRB+

同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，2；PGM1, 1；PGM3，1

C33A細胞特性

• C33A細胞來源於(yu) 一名66歲的白人子宮頸癌患者的宮頸上皮細胞。

• p53基因表達上調，並且在密碼子273處有點突變，導致Arg→Cys的替換。

• C33A細胞具有假二倍體(ti) 核型，模式染色體(ti) 數為(wei) 46，存在染色體(ti) 不穩定性。

• C33A細胞視網膜母細胞瘤蛋白（pRB）存在，但其大小異常。

• C33A細胞對人乳頭瘤病毒DNA和RNA呈陰性。

• C33A細胞係具有致瘤性。

• 由N·Auersperg從(cong) 宮頸癌切片中建立，最初展示亞(ya) 二倍體(ti) 核型和上皮細胞形態。

C33A細胞參數表

C33A人宮頸癌細胞係培養

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出含有1mL C33A細胞懸液的凍存管，在37℃水浴中快速搖晃解凍。

• 將解凍後的C33A細胞懸液緩慢滴入到含有4-6mL預熱的完全培養(yang) 基（例如MEM或DMEM）的離心管中，混合均勻。

• 在1000rpm條件下離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 補充4-6mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕吹勻後將C33A細胞懸液轉移至含有6-8mL完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或培養(yang) 皿）中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。

• 第二天檢查C33A細胞的粘附和生長情況，根據需要進行細胞密度的檢查和調整。

細胞傳代

• 當C33A細胞生長至80%-90%的密度時，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

• 加入1-2mL0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液於(yu) 培養(yang) 瓶中（具體(ti) 用量根據瓶子大小調整），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（觀察細胞是否開始脫落）。

• 在顯微鏡下觀察C33A細胞的消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，快速將培養(yang) 瓶拿回操作台輕輕敲打幾下。

• 加入3-4mL含有10% FBS的培養(yang) 基來終止消化，輕輕吹打混勻。

• 在1000rpm條件下離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 補充1-2mL預熱的培養(yang) 基後吹勻，按1:2到1:5的比例將C33A細胞懸液分到新的含有5-6mL預熱培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO2的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 在C33A細胞生長狀態良好時進行細胞凍存。

• 棄去培養(yang) 基，加入適量的胰酶消化細胞至大部分細胞變圓脫落。

• 在1000rpm條件下離心8-10分鍾，去除上清液。

• 根據凍存需求，將C33A細胞重懸於(yu) 含有90% FBS和10% DMSO的凍存液中，建議凍存密度為(wei) 1×10^6~1×10^7個(ge) 細胞/ml。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，過夜置於(yu) -80℃冰箱冷凍，隨後轉移到液氮容器中長期保存。