U14細胞（小鼠子宮頸癌細胞）

U14小鼠子宮頸癌細胞係源於(yu) 1958年，最初是通過將20-甲基膽蒽注入KM幼鼠的子宮頸以誘發癌症，隨後將誘導的瘤細胞懸液注射到615小鼠的腹腔中，利用腹水進行原代培養(yang) 。最終通過將這些細胞懸液在雌性小鼠的皮下進行移植和傳(chuan) 代，建立了U14細胞係。

U14細胞參數表

U14小鼠子宮頸癌細胞培養教程

U14細胞複蘇步驟

• 準備5mL完全培養(yang) 基置於(yu) 15mL離心管中，37℃水浴預熱，適合U14細胞的複蘇。

• 取出凍存的U14細胞，放入37℃水浴中快速解凍（約1分鍾）。

• 將解凍的U14細胞懸液加入到預熱培養(yang) 基的離心管中，1000rpm離心5分鍾。

• 吸棄上清後，用2mL完全培養(yang) 基重懸U14細胞，轉移至T25培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃，5% CO2飽和濕度的培養(yang) 箱中。

• 24小時後觀察U14細胞貼壁情況，吸棄舊培養(yang) 基，換上新鮮預熱的完全培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

U14細胞傳代步驟

• 觀察細胞密度：當U14細胞生長至80%-90%匯合時進行傳(chuan) 代。

• 吸棄舊培養(yang) 基，用1mL無菌PBS清洗一次，去除殘餘(yu) 培養(yang) 基和血清，適合U14細胞的處理。

• 加入1mL 0.25%胰酶，37℃消化1-2分鍾，待U14細胞鬆散後，加入完全培養(yang) 基終止消化。

• 收集U14細胞懸液，1000rpm離心5分鍾，吸棄上清，用完全培養(yang) 基重懸U14細胞。

• 按1:2比例將重懸的U14細胞加入新的培養(yang) 瓶中，繼續培養(yang) 。

U14細胞凍存步驟

• 製備凍存液：現用現配，成分為(wei) 90%胎牛血清和10%DMSO，適合U14細胞的凍存。

• 當U14細胞達到適當密度，吸棄培養(yang) 基，用PBS潤洗後胰酶消化收集U14細胞。
  

• 1000rpm離心5分鍾，棄去上清，用凍存液重懸U14細胞。

• 將U14細胞懸液分裝到凍存管中，逐步降溫（-80℃過夜後轉入液氮中長期保存）。
  

注意事項

• 運輸用培養(yang) 基：運輸用的培養(yang) 基不宜再次用於(yu) 培養(yang) U14細胞，應按照說明書(shu) 重新配置完全培養(yang) 基。

• 顯微鏡觀察：收到U14細胞後，用顯微鏡確認U14細胞狀態並拍照留存。

• 初次傳(chuan) 代：收到U14細胞後首次傳(chuan) 代建議使用T25培養(yang) 瓶按1:2比例傳(chuan) 代。

常見問題及解決方法

• U14細胞貼壁不良：

• 原因：運輸過程中的振動可能導致U14細胞脫落。

• 解決(jue) 方法：將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中靜置2-3小時，讓U14細胞重新貼壁。

  
  

• U14細胞生長速度緩慢：

• 原因：培養(yang) 基配方不當或U14細胞密度過低。

• 解決(jue) 方法：確保使用正確的培養(yang) 基（DMEM+10% FBS+1% P/S），並保持適當的U14細胞密度。

  
  

• U14細胞汙染：

• 原因：操作不當或培養(yang) 環境不潔淨。

• 解決(jue) 方法：嚴(yan) 格遵守無菌操作規程，定期檢查U14細胞是否有汙染跡象。

  
  

• 傳(chuan) 代後U14細胞死亡率高：

• 原因：胰酶消化時間過長或操作不當。

• 解決(jue) 方法：控製胰酶消化時間（1-2分鍾），輕柔操作，避免過度吹打。

  
  

• U14細胞形態異常：

• 原因：培養(yang) 條件不適或U14細胞狀態不佳。

• 解決(jue) 方法：確保培養(yang) 環境正確（37°C，5% CO2，飽和濕度），定期觀察U14細胞形態。

  
  

• 凍存U14細胞複蘇率低：

• 原因：凍存或複蘇過程操作不當。

• 解決(jue) 方法：嚴(yan) 格按照標準流程進行凍存和複蘇，使用90%胎牛血清+10% DMSO的凍存液。

  
  

• U14細胞密度控製不當：

• 原因：傳(chuan) 代比例或頻率不適合。

• 解決(jue) 方法：根據U14細胞生長情況調整傳(chuan) 代比例（1:2-1:4），每2-3天換液一次。

  
  

• 培養(yang) 基變色過快：

• 原因：U14細胞代謝旺盛或汙染。

• 解決(jue) 方法：增加換液頻率，檢查是否有汙染。

  
  

• U14細胞脫落：

• 原因：培養(yang) 瓶表麵處理不當或U14細胞過度生長。

• 解決(jue) 方法：使用處理過的培養(yang) 瓶，適時傳(chuan) 代避免U14細胞過度生長。

  
  

• 成瘤率下降：

• 原因：U14細胞傳(chuan) 代次數過多或培養(yang) 條件長期不適。

• 解決(jue) 方法：控製傳(chuan) 代次數，定期檢查和優(you) 化培養(yang) 條件。