msto-211h細胞 (人肺癌細胞)

MSTO-211H細胞株於(yu) 1985年從(cong) 一名62歲男性的胸腔積液中（患有肺雙相間皮瘤並接受過多種化療藥物聯合治療）分離，患者在細胞株建立前未接受過放療。

MSTO-211H細胞係表現出成纖維細胞樣形態，細胞株的模態數為(wei) 72，範圍在70至78之間。
在培養(yang) 過程中，MSTO-211H細胞的飽和密度可達每平方厘米400000個(ge) 細胞。當細胞達到這一密度時，會(hui) 開始從(cong) 培養(yang) 表麵脫落。

msto-211h細胞分子表達

• msto-211h細胞表達高親(qin) 和力的EGF結合位點

• msto-211h細胞表達神經元特異性烯醇酶(NSE)和人絨毛膜促性腺激素(HCG)的α與(yu) β亞(ya) 基

• msto-211h細胞過表達c-myc原癌基因,但未觀察到基因重排或擴增

• V-src、v-abl、v-erbB、c-raf1、Ha-ras、Ki-ras和N-ras的表達呈陽性

• 未檢測到N-myc、L-myc、c-myb、c-fos、v-fes、v-fms和v-sis癌基因的表達

• 未檢測到左旋多巴胺脫羧酶(DDC)、邦巴辛與(yu) 神經Tensin的表達

msto-211h細胞參數表

msto-211h人肺癌細胞培養教程

MSTO-211H細胞複蘇

• 將凍存的MSTO-211H細胞從(cong) 液氮中取出，迅速置於(yu) 37°C水浴中融化。
  

• 將MSTO-211H細胞懸液轉移到含有預熱完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中。

• 輕輕搖晃培養(yang) 瓶，使MSTO-211H細胞均勻分布。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 2-4小時，以穩定MSTO-211H細胞狀態。

MSTO-211H細胞傳代

• 傳(chuan) 代頻率：當MSTO-211H細胞密度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

• 推薦傳(chuan) 代比例：1:3-1:4。

• 吸出原培養(yang) 液。
  

• 加入約2mL PBS，輕輕晃動培養(yang) 瓶潤洗MSTO-211H細胞，然後吸出PBS丟(diu) 棄。

• 加入約1mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養(yang) 瓶使溶液浸潤所有MSTO-211H細胞。

• 放入培養(yang) 箱消化，當顯微鏡下MSTO-211H細胞變圓並出現間隙時終止消化，全程不要拍打培養(yang) 瓶。

• 加入約3mL含血清的培養(yang) 基終止消化，輕柔吹打MSTO-211H細胞使其脫壁並形成單細胞懸浮液。

• 收集MSTO-211H細胞懸液並以1200rpm/min離心3分鍾，吸出上清丟(diu) 棄。

• 加入新鮮培養(yang) 基，混勻MSTO-211H細胞後按比例接種到新培養(yang) 瓶，補足培養(yang) 基，擰鬆瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yang) 。

操作技巧

• 輕柔操作：由於(yu) MSTO-211H細胞貼壁鬆散，操作時需盡量輕柔，避免劇烈的機械震動。

• 避免過度密集：MSTO-211H細胞的飽和濃度可達4×10^5/cm²，但達到這個(ge) 濃度時MSTO-211H細胞會(hui) 從(cong) 表麵脫落。因此，應在MSTO-211H細胞密度達到80-90%時及時傳(chuan) 代，避免過度密集。

MSTO-211H細胞凍存

• 凍存液配方：55%基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 將MSTO-211H細胞懸液分裝到凍存管中，每管約5×10^5個(ge) MSTO-211H細胞。

• 使用程序降溫儀(yi) 或梯度降溫法將MSTO-211H細胞緩慢冷卻至-80°C。

• 24小時後轉移到液氮中長期保存。

MSTO-211H細胞在高密度時的脫落原因及解決方法

• 細胞特性：MSTO-211H細胞具有貼壁鬆散的特性，貼壁能力較弱。

• 接觸抑製：高密度時MSTO-211H細胞間接觸抑製作用增強，導致黏附力減弱。

• 營養(yang) 競爭(zheng) ：高密度培養(yang) 時營養(yang) 物質消耗加快，可能導致MSTO-211H細胞代謝異常，影響黏附能力。

• pH值變化：高密度培養(yang) 加速培養(yang) 基pH值的變化，影響MSTO-211H細胞黏附蛋白的表達或功能。

• 細胞分泌物累積：高密度時MSTO-211H細胞分泌的代謝產(chan) 物和因子累積，影響黏附狀態。

• 空間限製：高密度生長時可用空間減少，導致MSTO-211H細胞脫落。

解決方法

• 控製細胞密度：在MSTO-211H細胞密度達到80-90%時及時傳(chuan) 代，推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:3-1:4。

• 優(you) 化培養(yang) 基配方：使用RPMI-1640培養(yang) 基，添加10% FBS和1% P/S。可考慮添加細胞外基質蛋白（如纖連蛋白或膠原蛋白）以增強黏附。

• 及時換液：每周換液2-3次，保持培養(yang) 環境穩定。換液時預熱培養(yang) 基避免溫度驟變。

• 輕柔操作：操作時盡量輕柔，避免劇烈震動或機械刺激。

• 優(you) 化培養(yang) 表麵：使用預塗細胞外基質蛋白的培養(yang) 皿或瓶，增強黏附能力。

• 調整培養(yang) 條件：確保培養(yang) 在37°C、5% CO2的環境中，保持適當濕度避免培養(yang) 基蒸發。

• 減少消化時間：傳(chuan) 代時一旦觀察到MSTO-211H細胞開始脫離，立即終止消化。使用溫和消化方法如Accutase或TrypLE。

• 監控pH值：定期檢查培養(yang) 基pH值，必要時使用HEPES緩衝(chong) 液穩定pH。

• 添加生長因子：可添加適量表皮生長因子(EGF)或其他生長因子，促進MSTO-211H細胞黏附和生長。