RKO-AS45-1細胞（人結腸癌轉基因細胞）

RKO-AS45-1是一種人結腸癌轉基因細胞係，由RKO結腸癌細胞通過轉染人GADD45 cDNA開放閱讀框到表達載體(ti) pCMV.3後建立。

RKO-AS45-1人結腸癌轉基因細胞特性特征

• 含有穩定整合的巨細胞病毒(CMV)啟動子驅動的GADD45a表達載體(ti) 、過度表達Gadd45 RNA和蛋白質.

• p53基因呈陽性(p53+)，但表達不足；GADD45基因受p53調控.

• GADD45蛋白表達水平高於(yu) 母係RKO細胞.
  

• DNA修複能力降低，特別是對紫外線誘導的DNA損傷(shang) 的修複能力減弱.
  

• GADD45蛋白與(yu) 參與(yu) 細胞周期調控和DNA修複的蛋白質相互作用

• RKO-AS45-1細胞係可與(yu) 其親(qin) 本細胞係RKO一起用於(yu) 研究GADD45在DNA修複、細胞凋亡和藥物敏感性方麵的影響。
  

RKO-AS45-1人結腸癌轉基因細胞參數表

RKO-AS45-1人結腸癌轉基因細胞培養教程

細胞複蘇

• 預熱培養(yang) 基至37°C。
  

• 準備好含有培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（T25或T75瓶）。

• 從(cong) 液氮中取出凍存的rkoas451細胞管，迅速放入37°C水浴中搖動解凍，約1-2分鍾。
  

• 解凍後立即用75%酒精擦拭細胞管外表麵，轉移至無菌操作台。

• 用1 ml預熱的培養(yang) 基緩慢加入rkoas451細胞管中，輕輕混勻。

• 將rkoas451細胞懸液轉移到含有5 ml預熱培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中。
  

• 置於(yu) 37°C，5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) ，24小時後換液。

細胞傳代

• 預熱培養(yang) 基至37°C。
  

• 準備好新的培養(yang) 瓶。

• 吸棄舊培養(yang) 基，用PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 液）洗滌rkoas451細胞一次。
  

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化2-5分鍾，直至rkoas451細胞脫落。

• 加入2-3倍體(ti) 積的培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打細胞，使rkoas451細胞完全懸浮。
  

• 按1:3或1:4的比例將rkoas451細胞懸液分裝到新的培養(yang) 瓶中。
  

• 加入適量預熱的培養(yang) 基，置於(yu) 37°C，5% CO2培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 預熱培養(yang) 基至37°C。
  

• 準備凍存管和凍存液（55%基礎培養(yang) 基，40%FBS，5%DMSO）。

• 按上述步驟消化並收集rkoas451細胞。
  

• 細胞懸液離心，1000 rpm，5分鍾，棄上清。

• 重懸rkoas451細胞於(yu) 預冷的凍存液中，細胞濃度為(wei) 1x10^6 cells/ml。
  

• 將rkoas451細胞懸液分裝到凍存管中，每管1 ml。
  

• 逐步降溫：先置於(yu) -80°C冰箱中過夜，然後轉移到液氮中長期保存。

其他注意事項

• 支原體(ti) 檢測: 每次傳(chuan) 代前後應進行支原體(ti) 檢測，確保rkoas451細胞無汙染。

• STR鑒定: 定期進行rkoas451細胞STR鑒定，確認細胞係的身份和純度。

• 細胞觀察: 每天觀察rkoas451細胞生長狀態，及時換液和傳(chuan) 代，避免細胞過度融合。