
GP2d細胞(人結腸癌細胞) (暫不提供)
- 來源:結腸腺癌
- 細胞特征:貼壁細胞 ,上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:GP2d細胞係與(yu) GP5d細胞係來自同一腺癌,具有相似的遺傳(chuan) 變化
GP2d細胞係來源於(yu) 一名71歲女性的結腸癌組織。該患者在經曆了結腸癌手術切除後,發生了局部複發,且該腫瘤被診斷為(wei) Duke B級低分化腺癌。在手術前,患者未接受過化療或放療,同時具有顯著的家族結腸癌病史,包括兩(liang) 名一級親(qin) 屬在55歲以下因結腸癌去世。
GP2d細胞與(yu) GP5d細胞係均源自同一腺癌,但二者在細胞形態上有所不同,盡管具有類似的遺傳(chuan) 變異。GP2d細胞係顯示出5號染色體(ti) 14q至22q區域的缺失,以及10q11和10q21區域的反向重複。相較於(yu) GP5d細胞,GP2d細胞在表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子α(TGFα)和胰島素的存在下表現出更強的生長反應。此外,GP2d細胞的mRNA中安非他酮的表達水平顯著高於(yu) GP5d細胞,後者幾乎無法檢測到此物質的存在。
GP2d細胞分子特征
基因組特征:GP2d細胞在5號染色體(ti) 的14q至22q區域存在間隙缺失,同時在10q11和10q21區域有倒置重複。這些基因組變化與(yu) 結腸癌的腫瘤進展模式一致。
基因表達:GP2d細胞中安非他酮的mRNA表達量較高,而在GP5d細胞中幾乎檢測不到。這表明GP2d細胞在某些生長因子(如EGF、TGFα和胰島素)刺激下表現出顯著的生長反應。
GP2d細胞參數表
細胞名稱 | GP2d細胞(人結腸癌細胞) |
細胞別稱 | Gp2d; Gp2D; GP2D |
來源 | 結腸腺癌;女性;71歲 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
細胞類型 | 貼壁細胞 |
生物安全等級 | 1 |
培養基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S |
培養環境 | 溫度:37℃;氣相:5% CO2;飽和濕度 |
換液周期 | 每2-3天一次 |
培養基體積 | T25瓶:6-8ml;10cm皿:12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代周期 | 48-60小時 |
凍存條件 | 60%基礎培養基 + 30% FBS + 10% DMSO,液氮儲存 |
質量檢測 | 細菌、真菌、支原體檢測均為陰性 |
細胞特征 | 具有5號染色體(14q至22q區)中間缺失和10q11、10q21帶的反向重複。 |
對EGF、TGFα和胰島素有生長反應。 | |
安非他酮mRNA表達量高。 |
培養教程
GP2d人結腸癌細胞培養教程
細胞複蘇
取出GP2d細胞的凍存管,迅速放入37℃水浴中,輕輕搖晃約1-2分鍾,直至GP2d細胞完全解凍。
將解凍的1 mL GP2d細胞懸液加入4 mL完全培養(yang) 基(DMEM + 10% FBS)中,輕輕混合均勻。
以1000 RPM的速度離心4分鍾,棄去上清液。
加入1-2 mL完全培養(yang) 基,輕輕吹打以重懸GP2d細胞。
將GP2d細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中,放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。第二天檢查GP2d細胞的狀態和密度。
細胞傳代
當GP2d細胞密度達到80%-90%時,準備進行傳(chuan) 代。
棄去培養(yang) 基,用不含鈣、鎂離子的PBS洗滌GP2d細胞1-2次。
加入1 mL消化液(0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA),放置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾,直至GP2d細胞大部分變圓並脫落。
迅速加入少量完全培養(yang) 基以終止消化。
按6-8 mL/瓶的比例補加培養(yang) 基,輕輕混合後在1000 RPM下離心4分鍾,棄去上清液。
加入1-2 mL培養(yang) 基重懸GP2d細胞,輕輕吹打均勻後,將細胞懸液按1:2或1:3的比例分配到新的培養(yang) 瓶中,並補加8 mL培養(yang) 基。
細胞凍存
確保GP2d細胞處於(yu) 對數生長期時,棄去培養(yang) 基,用PBS清洗GP2d細胞一次。
加入1 mL胰酶,待GP2d細胞脫落後,加入1 mL含血清的培養(yang) 基終止消化。使用血球計數板計數細胞。
在1000 RPM下離心4分鍾,棄去上清液。根據細胞數量加入FBS和DMSO,DMSO的終濃度應為(wei) 10%,輕輕混合均勻。
每支凍存管中加入1 mL GP2d細胞懸液,標識清楚。
將凍存管包好,放置於(yu) 4℃冰箱中2小時,然後轉移至-20℃冰箱中2小時,再放入-80℃冰箱中過夜,最後轉移至液氮中儲(chu) 存。
注意事項
細胞狀態:確保GP2d細胞在複蘇前處於(yu) 對數生長期,避免過密或出現連片狀態。
消化控製:消化時間應適中,避免胰酶過度消化,吹打時要輕柔以減少泡沫產(chan) 生。
凍存液:凍存液中FBS的濃度可以根據實驗需要調整,通常建議使用10%-20% FBS。
質量檢測:定期檢查GP2d細胞是否有細菌、真菌或支原體(ti) 汙染,以確保細胞培養(yang) 的穩定性。
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STR鑒定及相關
Amelogenin | X |
CSF1PO | 9,12 |
D3S1358 | 16,18 |
D5S818 | 11,12 |
D7S820 | 9,11 |
D8S1179 | 10,12 |
D13S317 | 8,12 |
D16S539 | 11,13 |
D18S51 | 12,13 |
D21S11 | 29,30 |
FGA | 23 |
Penta D | 12,13 |
Penta E | 7,10 |
TH01 | 7,9.3 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 17,18 |
參考文獻
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