HKF細胞（人瘢痕疙瘩成纖維細胞SV40永生化）

HKF(SV40)人瘢痕疙瘩成纖維細胞是通過手術切除的瘢痕疙瘩組織培養(yang) ，並通過慢病毒介導的SV40基因轉染實現永生化。瘢痕疙瘩是一種病理性瘢痕，具有侵襲性和高複發率，其中成纖維細胞在其形成和發展中起關(guan) 鍵作用。在適宜的條件下，HKF-SV40細胞可以穩定傳(chuan) 代至少20代以上。HKF細胞係是研究瘢痕疙瘩的病理機製以及開發相關(guan) 治療的重要工具。

HKF人瘢痕疙瘩成纖維細胞特性特征

• HKF(SV40)細胞在適宜條件下能夠穩定傳(chuan) 代20代以上，表現出較低的血清需求，能夠在無錨著依賴的條件下生長，甚至在軟瓊脂中形成克隆。

• 增殖能力：由於(yu) SV40大T抗原的轉染，細胞增殖能力顯著增強，克服了正常成纖維細胞的衰老限製。

• SV40大T抗原：SV40大T抗原是該細胞係的關(guan) 鍵轉染因子，能夠與(yu) 細胞周期調控蛋白（如p53和Rb）結合，從(cong) 而抑製它們(men) 的抑製作用，促進細胞的增殖和生長。

• 大T抗原的作用機製包括：激活宿主細胞的DNA合成。誘導細胞周期進程，促進細胞增殖。

• 基因表達：轉染SV40後，細胞中大T抗原的表達量顯著增加，這導致HKF細胞在增殖和生長方麵的特性發生變化。

• 端粒酶活性：SV40轉染的成纖維細胞中觀察到端粒的增長，表明HKF細胞可能具備端粒酶活性，這與(yu) 其永生化特性密切相關(guan) 。

HKF細胞SV40永生化參數表

HKF人瘢痕疙瘩成纖維細胞SV40永生化培養教程

HKF細胞的複蘇與初代培養

• 解凍細胞：將冷凍的HKF細胞迅速置於(yu) 37°C的水浴中解凍，輕輕搖晃使其完全融化。立即將細胞懸液轉移至預先準備好的15ml離心管中，加入10ml完全培養(yang) 基。

• 離心與(yu) 重懸：以200g離心5分鍾，棄去上清液。用5ml完全培養(yang) 基輕輕重懸HKF細胞，確保細胞不受損傷(shang) 。

• 接種細胞：將重懸後的HKF細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶中，加入8ml完全培養(yang) 基，輕輕搖晃以確保細胞均勻分布。

• 培養(yang) 條件：將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 。24小時後觀察HKF細胞的貼壁情況，若貼壁不完全，輕輕吸去舊培養(yang) 基，加入新鮮完全培養(yang) 基。

• 培養(yang) 基更換：每2-3天更換一次培養(yang) 基，直至HKF細胞生長至80%匯合。

HKF細胞的傳代

• 細胞洗滌：當HKF細胞生長至80%匯合時，小心吸去培養(yang) 基，用PBS緩衝(chong) 液輕輕洗滌細胞兩(liang) 次，以去除殘餘(yu) 的血清和其他雜質。

• 消化細胞：加入2ml 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育2-3分鍾，直至HKF細胞開始從(cong) 培養(yang) 瓶壁上脫落。

• 終止消化：加入5ml完全培養(yang) 基以終止胰蛋白酶的消化作用。用移液槍輕輕吹打，確保HKF細胞完全分散。

• 離心與(yu) 重懸：將HKF細胞懸液轉移至15ml離心管中，以200g離心5分鍾，棄去上清液。用5ml完全培養(yang) 基重懸HKF細胞，並計算細胞數量。

• 重新接種：根據需要的接種密度，將HKF細胞懸液分配至新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，加入適量的完全培養(yang) 基。

• 持續培養(yang) ：將培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿放回培養(yang) 箱中，每2-3天更換培養(yang) 基，直至HKF細胞再次生長至80%匯合，重複上述傳(chuan) 代步驟。

HKF細胞的凍存

• 細胞收集：從(cong) 培養(yang) 瓶中收集處於(yu) 對數生長期的HKF細胞，轉移至離心管中，以200g離心5分鍾。

• 準備凍存液：棄去上清，用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸HKF細胞，調整細胞濃度為(wei) 1×10^6-1×10^7 cells/ml。

• 凍存步驟：將HKF細胞懸液分裝至凍存管中，置於(yu) -80°C冰箱中預凍存24小時。

• 長期保存：將凍存管轉移至液氮罐中進行長期保存，以確保HKF細胞的存活和穩定性。

注意事項

• 在HKF細胞傳(chuan) 代過程中要注意避免過度消化，以免損傷(shang) 細胞活性。

• 凍存液中的DMSO對細胞具有一定的毒性，需確保凍存過程快速進行，並盡快將HKF細胞轉入液氮保存。

• 複蘇後初代培養(yang) 時，要特別注意培養(yang) 基的更新，確保HKF細胞能夠適應體(ti) 外環境並快速貼壁生長。