MeWo細胞（人惡性黑色素瘤細胞）

MeWo細胞（人惡性黑色素瘤細胞係）是一種來源於(yu) 一名78歲白人男性患者皮膚的惡性黑色素瘤細胞係，具體(ti) 提取自其轉移至淋巴結的腫瘤組織。MeWo細胞由Y. Kodera和M. Bean於(yu) 1974年建立，展現出成纖維細胞樣形態，具有顯著的增殖和侵襲能力，適合在體(ti) 外培養(yang) 。由於(yu) MeWo細胞源於(yu) 真實的惡性黑色素瘤病例，因此在癌症生物學、藥物篩選及毒理學研究中具有重要應用價(jia) 值，成為(wei) 深入理解黑色素瘤病理過程及開發新療法的重要工具。

MeWo細胞特性特征

• 抗原表達:血型: A型血

• HLA抗原: HLA A2、A26、Bw16、Bw18

• 基因表達:表達與(yu) A型血相關(guan) 的基因。

• HLA基因：A2、A26、Bw16和Bw18。

• 同工酶特征：ACP1: B型；AK-1: 1型；ES-D: 1型；G6PD: B型；GLO-I: 2型；PGM1: 1-2型；PGM3: 1型

• 致瘤性: MeWo細胞在裸鼠體(ti) 內(nei) 形成腫瘤

MeWo細胞參數表

MeWo人惡性黑色素瘤細胞培養教程

收貨處理

• 觀察細胞狀態: 收到MeWo細胞後，檢查培養(yang) 瓶是否完好，培養(yang) 液是否漏液或渾濁，凍存管是否完整。

• 消毒處理: 用75%酒精對培養(yang) 瓶表麵進行消毒處理。

• 穩定狀態: 將T-25培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中靜置2-4小時，以便穩定MeWo細胞狀態。

MeWo細胞複蘇

• 使用基礎培養(yang) 基（如MEM）+10%胎牛血清+1%抗生素（雙抗）。
  

• 從(cong) 液氮或-80℃冰箱中取出凍存的MeWo細胞，放入37℃水浴中迅速搖晃解凍（約1分鍾）。
  

• 將解凍的MeWo細胞與(yu) 預熱的完全培養(yang) 基（5 mL）混合，轉移至15 mL離心管中，1000 rpm離心5分鍾。
  

• 吸棄上清，得到MeWo細胞沉澱，用2 mL完全培養(yang) 基輕輕重懸細胞。
  

• 將重懸的MeWo細胞加入到T-25培養(yang) 瓶中，做好標記，放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。
  

• 24小時後觀察MeWo細胞的貼壁情況，吸棄舊培養(yang) 基，加入新鮮預熱（室溫或37℃）的完全培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。
  

MeWo細胞傳代

• 當MeWo細胞生長至80%-90%匯合度時進行傳(chuan) 代。
  

• 吸棄舊的培養(yang) 基，加入1 mL無菌PBS潤洗一次，以去除殘餘(yu) 的培養(yang) 基及血清。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），在37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾。觀察至細胞皺縮變圓後終止消化。
  

• 加入1 mL含FBS的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕拍打使MeWo細胞脫落成單個(ge) 細胞懸液。
  

• 收集懸液於(yu) 15 mL離心管中，1000 rpm離心5分鍾。
  

• 收集MeWo細胞沉澱，用完全培養(yang) 基重懸，一分為(wei) 二（可根據生長速度調整比例），分別加入到新的培養(yang) 瓶中，做好標記，放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。
  

MeWo細胞凍存

• 按照傳(chuan) 代方法消化收集MeWo細胞沉澱，並取少量用於(yu) 計數。
  

• 用預冷的凍存液（90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO）重懸MeWo細胞，加入到1.2 mL凍存管中，密度為(wei) 1×10⁶個(ge) /mL。
  

• 將凍存管放入程序凍存盒，在-80℃過夜後轉入液氮長期保存。
  

注意事項

• 在整個(ge) 操作過程中應保持無菌環境。

• 遇到任何異常情況（如運輸損壞、溫度波動等），應及時記錄並聯係供應商。

• 確保所有試劑和材料均為(wei) 無菌，並在使用前進行適當預熱。

常見問題及解決方案

• MeWo細胞分化

• 問題: 在傳(chuan) 代3-4代後，MeWo細胞可能出現分化，變大並貼壁緊密，呈現“攤雞蛋”樣。

• 解決(jue) 方案: 確保使用高質量的培養(yang) 基和血清，定期更換培養(yang) 基以維持細胞活性。

  
  

• MeWo細胞形態改變

• 問題: 複蘇或傳(chuan) 代後，MeWo細胞可能呈圓形或近圓形，短小突觸消失。

• 解決(jue) 方案: 觀察細胞貼壁狀態，適當調整培養(yang) 條件，確保MeWo細胞在適宜的環境中生長。

  
  

• 消化不完全

• 問題: 使用胰酶消化時，經驗不足可能導致MeWo細胞形態改變或難以消化。

• 解決(jue) 方案: 控製消化時間，避免過度消化；可以嚐試使用HEPES緩衝(chong) 液調整pH值以改善消化效果。

  
  

• MeWo細胞脫落困難

• 問題: 更換新鮮培養(yang) 基後，MeWo細胞難以從(cong) 培養(yang) 瓶壁上脫落。

• 解決(jue) 方案: 在更換培養(yang) 基前先用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞；如果密度較大，可以直接在原培養(yang) 基中滴加HEPES緩衝(chong) 液使pH變酸，再進行吹打。

  
  

• MeWo細胞死亡或碎片

• 問題: 運輸過程中溫度變化或劇烈碰撞可能導致部分MeWo細胞死亡或形成碎片。

• 解決(jue) 方案: 收到MeWo細胞後應立即複蘇並觀察狀態；如發現異常及時聯係供應商。

  
  

• 支原體(ti) 汙染

• 問題: 長期使用抗生素可能掩蓋支原體(ti) 感染。

• 解決(jue) 方案: 定期檢測支原體(ti) ，並盡量減少抗生素的常規使用，以保持MeWo細胞的健康狀態。

  
  

• 培養(yang) 基質量

• 問題: 培養(yang) 基或血清的質量不佳會(hui) 影響MeWo細胞的生長。

• 解決(jue) 方案: 選擇經過驗證的高質量培養(yang) 基和血清，並注意不同批次之間的差異。

  
  

• 凍存和複蘇問題

• 問題: 凍存後複蘇時MeWo細胞活性低。

• 解決(jue) 方案: 確保凍存液配方正確，並嚴(yan) 格按照凍存和複蘇步驟操作；盡量縮短凍存管在-80℃中的時間，以減少對MeWo細胞的損傷(shang) 。