WM115細胞（人惡性黑色素瘤細胞）

WM115細胞係是一種源自55歲女性患者原發性淺表性黑色素瘤的細胞係，WM115細胞係在右前腿的轉移部位建立。患者的腫瘤為(wei) 垂直生長期(VGP)，Clark分級為(wei) III級，厚度為(wei) 2.24毫米。

WM115細胞特性特征

• Wm115細胞具有轉移能力和致瘤性、屬於(yu) 垂直生長期（VGP）原發性黑色素瘤細胞係、在免疫功能受損的小鼠體(ti) 內(nei) 可形成異種移植物腫瘤

• BRAF基因：在密碼子600處攜帶V600D（Val600Asp）突變

• PTEN：表現出功能喪(sang) 失，包括半合子缺失

• N-RAS、c-KIT和CDK4基因：均為(wei) 野生型

• Wm115細胞與(yu) WM239A、WM165-1和WM266-4細胞係來自同一患者
  

• WM115來源於(yu) 原發性腫瘤，而其他三種來自單個(ge) 淋巴結轉移

WM115細胞參數表

WM115人惡性黑色素瘤細胞培養教程

WM115細胞複蘇

• 快速解凍：將凍存的WM115細胞從(cong) 液氮中取出，置於(yu) 37℃水浴中快速解凍1-2分鍾，注意不要超過2分鍾以免影響WM115細胞活性。

• 轉移細胞懸液：將解凍的WM115細胞懸液迅速轉移到含有4mL預溫培養(yang) 基的15mL離心管中。

• 離心：在1000rpm下離心3分鍾，小心棄去上清。

• 重懸細胞：用1-2mL新鮮培養(yang) 基輕輕重懸WM115細胞。

• 接種：將WM115細胞懸液轉移到含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中。

• 培養(yang) ：將培養(yang) 容器放置於(yu) 37℃，5% CO2的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。

• 更換培養(yang) 基：次日觀察WM115細胞狀態，進行新鮮培養(yang) 基的更換。

WM115細胞傳代

• 當WM115細胞密度達到80%-90%時，應進行傳(chuan) 代，以保持WM115細胞的活力和增殖能力：

• 去除培養(yang) 上清：棄去WM115細胞培養(yang) 上清液後，用PBS輕柔衝(chong) 洗WM115細胞1-2次。

• 消化：加入適量0.25% Trypsin-0.53mM EDTA溶液，37℃下消化約1分鍾。

• 觀察脫落：在顯微鏡下觀察WM115細胞脫落情況，輕拍培養(yang) 瓶以促進WM115細胞脫落。

• 終止消化：加入等體(ti) 積的培養(yang) 基終止消化過程。

• 離心：在1000rpm下離心4分鍾，棄去上清液。

• 重懸細胞：用新鮮培養(yang) 基重懸WM115細胞。

• 接種新容器：按1:2至1:4的比例將WM115細胞分裝到新的培養(yang) 容器中，補加適量培養(yang) 基。

• 培養(yang) ：將新培養(yang) 容器置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) WM115細胞。

WM115細胞凍存

• 為(wei) 了長期保存WM115細胞株，應在對數生長期進行細胞凍存：

• 收集細胞：收集生長狀態良好的WM115細胞。

• 離心：在1000rpm下離心5分鍾，棄去上清。

• 重懸細胞：用預冷的凍存液重懸WM115細胞。凍存液配方：55%基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 調整密度：將WM115細胞密度調整至1×10^6 cells/mL。

• 分裝凍存管：將WM115細胞懸液分裝入凍存管中，每管1mL。

• 程序降溫：將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜。

• 轉入液氮：次日將凍存管轉入液氮中長期保存WM115細胞。

WM115細胞培養注意事項

• 培養(yang) 環境：37℃，5% CO2，飽和濕度。

• 換液頻率：每周2-3次，以維持WM115細胞培養(yang) 基的新鮮和WM115細胞的正常代謝。

• 傳(chuan) 代密度：應保持WM115細胞密度在80%-90%之間進行傳(chuan) 代。

• 倍增時間：約50-60小時。

• 細胞形態：WM115細胞呈現上皮樣細胞形態，貼壁生長。

• 汙染控製：定期進行支原體(ti) 檢測，確保使用無菌技術操作以避免WM115細胞培養(yang) 中的汙染。