RWPE2細胞（人前列腺正常細胞）

RWPE-2細胞係來源於(yu) 54歲白人男性的前列腺正常上皮細胞，最初是通過對RWPE-1細胞係的轉化而獲得。RWPE-1細胞係是從(cong) 前列腺外周區的正常上皮細胞中提取，並通過轉染攜帶人乳頭瘤病毒18（HPV-18）基因組的質粒建立的。這一轉染步驟賦予了細胞不死化特性，使其能夠在體(ti) 外長期存活。RWPE-2細胞在第14代，大多數細胞在近二倍體(ti) 範圍內(nei) （48-54），主要群體(ti) 為(wei) 51，XY。

RWPE2細胞特性特征

• RWPE2細胞表達細胞角蛋白8和細胞角蛋白18，這些是上皮細胞的標誌性蛋白。

• RWPE2細胞雄激素受體(ti) （AR）表達上調，尤其是在暴露於(yu) 雄激素後。

• 抗原表達：激肽釋放酶3（KLK3），即前列腺特異性抗原（PSA），在雄激素刺激下表達。

• 致瘤性：RWPE-2細胞在軟瓊脂中能夠形成小菌落，並且在注射到裸鼠體(ti) 內(nei) 時能形成腫瘤，顯示出其致瘤能力。

• 衍生細胞係：RWPE-1細胞還通過暴露於(yu) N-甲基-N-硝基脲（MNU）衍生出了多個(ge) 用於(yu) 模擬前列腺癌症不同進展階段的細胞係，包括WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26。

RWPE2細胞參數表

RWPE2人前列腺正常細胞培養教程

細胞複蘇

• 將37℃水浴鍋預熱。
  

• 準備好適合RWPE2細胞生長的K-SFM培養(yang) 基（含0.05 mg/ml BPE和5 ng/ml EGF）。

• 從(cong) 液氮中取出凍存的RWPE2細胞凍存管，迅速在37℃水浴中搖晃解凍，時間約為(wei) 1-2分鍾，直到RWPE2細胞完全融化。
  

• 加入4 mL培養(yang) 基，輕輕混合均勻，以確保RWPE2細胞的充分懸浮。

• 在1000 rpm條件下離心5分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基後輕輕吹勻RWPE2細胞。

• 將細胞懸液轉移到適量的培養(yang) 瓶中（如T25瓶），加入適量的培養(yang) 基（約8 mL），置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) RWPE2細胞過夜。
  

• 第三天更換培養(yang) 基並檢查RWPE2細胞的密度。

RWPE2細胞傳代

• 當RWPE2細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗RWPE2細胞1-2次。

• 加入1 mL消化液（0.25%胰酶和0.02% EDTA），確保消化液覆蓋所有RWPE2細胞。
  

• 棄去消化液，將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化1-3分鍾，根據RWPE2細胞的消化情況觀察。

• 當大部分RWPE2細胞變圓並脫落時，迅速輕敲幾下培養(yang) 瓶，並加入6-8 mL新鮮培養(yang) 基以終止消化。
  

• 將RWPE2細胞懸液轉移到無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 補加1-2 mL新鮮培養(yang) 基後輕輕吹勻RWPE2細胞。

• 將RWPE2細胞懸液按1:2比例分配到新的含有8 mL培養(yang) 基的培養(yang) 皿或瓶中。

RWPE2細胞凍存

• 收集生長狀態良好的RWPE2細胞及其培養(yang) 液，轉移至無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 用PBS清洗一次後，再次棄去PBS。加入1 mL血清重懸RWPE2細胞，並進行細胞計數。
  

• 根據RWPE2細胞數量加入無血清凍存液，使最終細胞濃度達到5×10^6至1×10^7 cells/mL，輕輕混勻RWPE2細胞懸液。
  

• 每個(ge) 凍存管中加入1 mL RWPE2細胞懸液，並做好標識。
  

• 將RWPE2細胞凍存管放入-80℃冰箱冷凍24小時後，再轉入液氮罐儲(chu) 存。