WPMY-1細胞（人正常前列腺基質永生化細胞）

WPMY-1細胞是一種永生化的人類前列腺基質肌成纖維細胞係，於(yu) 1992年從(cong) 一位54歲白人男性供體(ti) 的前列腺組織中分離。WPMY-1細胞源自前列腺外周區的基質，與(yu) 來自相同組織區域的RWPE-1前列腺上皮細胞係一起，為(wei) 研究基質-上皮相互作用提供了寶貴的模型。

WPMY-1細胞通過使用pRSTV質粒載體(ti) 引入SV40大T抗原基因實現永生化，使其能夠無限增殖。WPMY-1細胞係的第66代細胞大多在58至68範圍內(nei) ，X、 -Y。表現出良好的穩定性。

WPMY-1細胞特征特性

• wpmy-1細胞在軟瓊脂中具有非錨定依賴性生長能力，菌落形成效率(CFE)為(wei) 0.7%

• wpmy-1細胞同時表達平滑肌α-肌動蛋白和波形蛋白、表達雄激素受體(ti) 、表達SV40大T抗原、p53和pRb表達不均一

• 基因表達：表達纖維連接蛋白基因

• 抗原表達：表達激肽釋放酶3 (KLK3，又稱前列腺特異性抗原PSA)

• 同工酶表達：AK-1，1；ES-D，2；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，0；PGM1，2；PGM3，1

• wpmy-1細胞對合成雄激素miboleron有反應，可刺激生長至對照組的145%
  

• 血小板源性生長因子BB、表皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子(10 ng/ml)可分別刺激生長至對照組的138%、143%和146%

• 轉化生長因子-β(10 ng/ml)可抑製血清誘導的生長至對照組的65%，抑製bFGF誘導的生長至對照組的30%

• 致瘤性：wpmy-1細胞在裸小鼠皮下注射時不形成腫瘤（通道22）

• 分泌極低水平的MMP-9，但高水平的MMP-2（顯著高於(yu) 上皮細胞）

WPMY-1細胞參數表

WPMY-1人正常前列腺基質永生化細胞培養教程

WPMY-1細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出WPMY-1細胞，迅速置於(yu) 37°C水浴中融化（約1-2分鍾）。

• 將WPMY-1細胞懸液轉移到含10 mL預熱完全培養(yang) 基的離心管中。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 用新鮮的完全培養(yang) 基重懸WPMY-1細胞，然後轉移到培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) WPMY-1細胞。

WPMY-1細胞日常培養

• 每2-3天更換一次WPMY-1細胞的培養(yang) 基。

• 觀察WPMY-1細胞的生長狀態，當細胞密度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

WPMY-1細胞傳代

• 吸出WPMY-1細胞的培養(yang) 基。

• 用不含Ca2+、Mg2+的PBS輕輕衝(chong) 洗WPMY-1細胞1-2次。

• 加入適量0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，37°C消化2-5分鍾。

• 顯微鏡下觀察WPMY-1細胞變圓並開始脫落時，輕拍培養(yang) 瓶。

• 加入含血清的完全培養(yang) 基終止消化。

• 吹打WPMY-1細胞，製成單細胞懸液。

• 按1:2或1:3的比例接種到新的培養(yang) 瓶中。

• 補加完全培養(yang) 基至適當體(ti) 積。

WPMY-1細胞凍存

• 製備WPMY-1細胞凍存液：55% 基礎培養(yang) 基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 收集對數生長期的WPMY-1細胞。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 用預冷的凍存液重懸WPMY-1細胞，調整細胞密度至1-2×10⁶/mL。

• 將WPMY-1細胞懸液分裝到凍存管中（1 mL/管）。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-80°C冰箱中降溫24小時。

• 轉入液氮中長期保存WPMY-1細胞。

注意事項

• 操作過程中保持無菌操作以避免WPMY-1細胞汙染。

• 避免WPMY-1細胞過度消化。

• 定期檢查WPMY-1細胞是否有汙染。

• 建議使用低代次（10代以內(nei) ）的WPMY-1細胞進行實驗。

• 首次傳(chuan) 代建議1:2比例，之後可根據WPMY-1細胞生長狀況調整傳(chuan) 代比例。

WPMY-1細胞對不同培養條件的表現

• 雄激素miboleron：可刺激WPMY-1細胞生長至對照組的145%。

• 生長因子：PDGF-BB、EGF和bFGF在10 ng/mL濃度下分別可刺激WPMY-1細胞生長至對照組的138%、143%和146%。

• TGF-β：在10 ng/mL濃度下可抑製血清誘導的WPMY-1細胞生長至對照組的65%，抑製bFGF誘導的生長至對照組的30%。

• 非錨定依賴性生長能力：WPMY-1細胞在軟瓊脂中的菌落形成效率(CFE)為(wei) 0.7%。

WPMY-1細胞的汙染檢測方法

• 支原體(ti) 檢測：常用PCR檢測WPMY-1細胞。

• 細菌檢測：通過顯微鏡觀察和培養(yang) 法檢測WPMY-1細胞。

• 酵母和真菌檢測：顯微鏡觀察和培養(yang) 法檢測WPMY-1細胞。