
9L/lacZ細胞是一種大鼠膠質肉瘤細胞係,最早於(yu) 1989年從(cong) 9L細胞係發展而來,9L細胞係是大鼠硝基脲誘導的膠質瘤細胞係。
9L/lacZ細胞係是通過將攜帶編碼β-半乳糖苷酶(lacZ基因)的大腸杆菌與(yu) 帶有G418抗性的Tn5新黴素基因的BAG逆轉錄病毒載體(ti) 感染9L細胞而獲得的。細胞在G418存在下培養(yang) 14天,經過克隆並檢測β-半乳糖苷酶生成後,9L/lacZ細胞係被成功建立。
9L/lacZ 大鼠膠質肉瘤細胞是該細胞係是為(wei) 數不多的能夠對大腦中的微觀腫瘤進行定量分析的模型之一。A7r5腫瘤細胞模仿了人腦腫瘤生長和擴散的重要特征。9L/lacZ細胞表達lacZ報告基因產(chan) 物,即大腸杆菌衍生的β-gal,並且可以鑒定單個(ge) 腫瘤細胞。淋巴細胞和其他反應細胞可以通過在同一載玻片上用抗體(ti) 雙重標記來識別。染色細胞和背景之間的對比有助於(yu) 圖像分析。β-gal的表達非常穩定,但9L/lacZ細胞在培養(yang) 基中生長數月後可能需要重新克隆。
細胞特性:
細胞形態: 成纖維細胞樣,呈貼壁生長的特性。
生長特性: 9L/lacZ細胞在培養(yang) 基DMEM中添加10% FBS和1% P/S的條件下生長良好。
基因表達: 9L/lacZ細胞表達β-半乳糖苷酶(β-gal),這是由大腸杆菌lacZ基因編碼的產(chan) 品。
致瘤性: 在CD Fischer 344大鼠的大腦中能夠形成腫瘤。
生物安全等級: 該細胞係被分類為(wei) 生物安全等級1級,屬於(yu) 無特殊危害生物。
9L/lacZ 大鼠膠質肉瘤細胞產品參數表
細胞名稱 | 9L/lacZ (大鼠膠質肉瘤細胞) (種屬鑒定正確) |
別稱 | 9L/LacZ;9llacz; |
來源 | 1989年從大鼠亞硝基脲誘導的膠質瘤細胞係9L發展而來 |
細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞類型 | 腫瘤細胞 |
生長培養基 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S |
凍存條件 | 凍存液:55% 基礎培養基 + 40% FBS + 5% DMSO 溫度:液氮 |
培養條件 | 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
推薦傳代比例 | 1:4-1:8 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
年齡(性別) | 雄性 |
生物安全等級 | 1 |
致瘤性 | 是的,在CD Fischer 344大鼠的大腦中形成腫瘤 |
基因表達情況 | beta-galactosidase (beta-gal) |
保藏機構 | ATCC; CRL-2200 |
表達物 | β-半乳糖苷酶(β-gal) |
轉染方法 | 逆轉錄病毒載體轉染 |
轉染選擇標記 | G418抗性(通過Tn5新黴素基因提供) |
應用 | 神經係統腫瘤生物學研究、治療策略研究、藥物篩選、圖像分析等 |
應用及研究價值:
作為(wei) 腫瘤模型: 9L/lacZ細胞是一種重要的大腦微觀腫瘤模型,其模擬了人類大腦腫瘤的生長和傳(chuan) 播特性。這種模型對於(yu) 研究大腦腫瘤的發生機製、生長特性以及治療方法具有重要意義(yi) 。
圖像分析: 由於(yu) 9L/lacZ細胞表達β-半乳糖苷酶,使得通過組織切片的組織化學染色可以輕鬆鑒定單個(ge) 腫瘤細胞。另外,通過雙標記抗體(ti) 進行淋巴細胞和其他響應細胞的鑒定,以及染色細胞和背景的對比分析有助於(yu) 圖像分析,為(wei) 研究者提供了一種便捷的方式來研究腫瘤細胞的特性。
基因表達穩定性: β-半乳糖苷酶的表達在9L/lacZ細胞中非常穩定,這使得該細胞係成為(wei) 進行長期實驗和研究的理想選擇,同時需要注意細胞在培養(yang) 數月後可能需要重新進行克隆。
培養教程
1.培養(yang) 基準備
使用完全培養(yang) 基:DMEM + 10% FBS + 1% P/S。
在使用前確保培養(yang) 基無菌,如有沉澱應充分振蕩均勻。
2. 培養(yang) 環境
環境:95%空氣,5%CO2,37℃。
使用CO2培養(yang) 箱,確保細胞處於(yu) 穩定的溫度和氣體(ti) 環境中。
3. 傳(chuan) 代方法
3.1. 消化與(yu) 收集
將原培養(yang) 液吸出。
加入適量的PBS輕輕晃動培養(yang) 瓶潤洗細胞,吸出PBS。
加入適量的胰酶,輕輕晃動培養(yang) 瓶使胰酶充分潤洗細胞。
將培養(yang) 瓶放入培養(yang) 箱消化,直至細胞間隙變大,但未完全脫落。
加入含血清的培養(yang) 基終止消化,吹打細胞使之脫壁並使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。
收集細胞懸液離心,離心後吸出上清丟(diu) 棄。
3.2. 接種與(yu) 培養(yang)
加入新鮮的完全培養(yang) 基,輕輕重懸細胞,按比例接種到新培養(yang) 瓶,補足培養(yang) 基。
培養(yang) 瓶蓋可以擰鬆或使用透氣瓶蓋。
放回培養(yang) 箱培養(yang) ,注意觀察細胞生長情況。
4. 液氮凍存操作
4.1. 凍存液製備
建議使用以下兩(liang) 種凍存液之一:
55%基礎培養(yang) 基+40% FBS + 5% DMSO
商品化無血清凍存液
4.2. 凍存操作
消化並離心獲得細胞沉澱後,加入配置好的凍存液輕輕重懸細胞。
將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管。
將凍存管放入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存。
5. 注意事項
傳(chuan) 代細胞時注意控製消化時間,避免過度消化導致細胞損傷(shang) 。
在液氮凍存後,及時複蘇一管細胞檢查凍存活性,確保凍存效果。
注意消化傳(chuan) 代細胞時吹打細胞要輕柔,避免影響細胞狀態。
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參考文獻
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