OVCAR8/Luc細胞（人卵巢癌腺癌細胞Luc熒光素酶標記）

OVCAR-8/Luc是攜帶熒光素酶基因（LUC）的穩定轉染人卵巢癌腺癌細胞係，LUC基因是通過慢病毒轉染方法引入的。OVCAR8/luc細胞能夠發出熒光信號，但隨著細胞傳(chuan) 代次數的增加，熒光強度可能逐漸減弱。為(wei) 了在實驗中維持熒光信號的強度，可以通過嘌呤黴素進行篩選。建議在收到細胞後至少傳(chuan) 代三次並凍存留種後，再開始篩選。初次篩選時，建議使用含有終濃度為(wei) 1 μg/mL嘌呤黴素的完全培養(yang) 基進行培養(yang) 。如果沒有出現細胞漂浮或漂浮細胞數量較少，可以逐步提高嘌呤黴素的濃度至2 μg/mL，繼續篩選，逐步增加至最高濃度5 μg/mL。如果篩選過程中漂浮細胞超過60%，應停止篩選，改用不含藥的培養(yang) 基，待細胞密度達到80%時，再繼續使用同樣濃度的嘌呤黴素篩選。篩選可以停止，當細胞在5 μg/mL的嘌呤黴素條件下正常增殖時，可以改為(wei) 不含藥的完全培養(yang) 基進行常規培養(yang) 。

OVCAR-8細胞係的來源是一名64歲高級別卵巢漿液性腺癌患者，這種細胞係屬於(yu) NCI-60係列，廣泛應用於(yu) 藥物篩選及分子靶點研究。通過慢病毒轉染熒光素酶基因，OVCAR-8/Luc細胞具備了熒光標記能力，因而在生物成像及藥物篩選研究中具有重要應用價(jia) 值。

OVCAR8/Luc細胞特性特征

• 為(wei) 維持熒光素酶（LUC）標記的強度，建議在OVCAR8培養(yang) 基中添加嘌呤黴素進行篩選。
  

• OVCAR8細胞係可以通過慢病毒轉染技術引入熒光素酶基因（LUC），使其具有熒光特性，適用於(yu) 生物成像和藥物篩選研究。

• OVCAR8細胞表達與(yu) 卵巢癌相關(guan) 的特定生物標誌物，如CA125、HER2/neu、雌激素受體(ti) （ER）和孕激素受體(ti) （PR）。

• OVCAR8細胞可能表現出與(yu) 藥物抗性相關(guan) 的特定基因或蛋白質表達模式。

• OVCAR-8細胞廣泛用於(yu) 卵巢癌的生物學研究、藥物篩選及耐藥機製的研究，提供了一個(ge) 重要的實驗模型

OVCAR8/Luc細胞參數表

OVCAR8/Luc人卵巢癌腺癌細胞Luc熒光素酶標記培養教程

OVCAR8細胞的接收與處理

• 如果OVCAR8細胞以凍存管形式運輸，應在幹冰中運送，接收到後可立即置於(yu) -80°C冰箱保存，或直接進行細胞複蘇。
  

• 若以T25培養(yang) 瓶運輸，OVCAR8細胞通常在常溫下運輸。收到後需在37°C培養(yang) 箱中靜置2-3小時，以穩定細胞狀態。

OVCAR8細胞複蘇

• 凍存管：將OVCAR8細胞凍存管置於(yu) 37°C水浴中快速複蘇，通常需要1-2分鍾，直到細胞完全融化為(wei) 止。
  

• T25培養(yang) 瓶：直接將其置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中，觀察OVCAR8細胞狀態。

• 外部消毒：使用75%酒精擦拭OVCAR8細胞凍存管或培養(yang) 瓶外壁，確保操作無菌。

• 複蘇細胞：更換培養(yang) 基：複蘇後，將OVCAR8細胞轉移至含10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S）的RPMI-1640完全培養(yang) 基中，輕輕混勻後，進行離心以去除DMSO。

OVCAR8細胞傳代

• 傳(chuan) 代時機：當OVCAR8細胞生長至80%-90%匯合時進行傳(chuan) 代。

• 棄去舊培養(yang) 基：用PBS清洗OVCAR8細胞一次，以去除殘留的血清。
  

• 細胞消化：加入0.25%胰蛋白酶，適量（約1 mL）覆蓋OVCAR8細胞，輕輕搖晃培養(yang) 瓶，然後置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中1-2分鍾，直到細胞完全脫落。

• 終止消化：用含FBS的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打使OVCAR8細胞充分懸浮。

• 離心：以1000 rpm離心5分鍾，去除上清液。

• 重懸細胞：用新鮮培養(yang) 基重懸OVCAR8細胞，以1:2至1:3的比例接種至新的培養(yang) 瓶中。

OVCAR-8/Luc細胞在不同濃度嘌呤黴素下的反應

• 1 μg/mL：細胞適應良好，生長正常，熒光強度開始維持。

• 2 μg/mL：細胞繼續生長，熒光強度有所提升，適合繼續篩選。

• 3 μg/mL：細胞生長依然正常，熒光強度穩定，適合長期培養(yang) 。

• 4 μg/mL：細胞增殖速度可能減緩，需觀察細胞狀態。

• 5 μg/mL：若細胞在此濃度下仍能正常增殖，表明細胞對嘌呤黴素的耐受性良好，此時可停止篩選，轉為(wei) 使用不含藥物的完全培養(yang) 基

維持OVCAR8細胞熒光強度的篩選方法

• 初次篩選時，在培養(yang) 基中加入1 μg/mL的嘌呤黴素。當OVCAR8細胞狀態良好且漂浮細胞較少時，逐步增加濃度至2 μg/mL、3 μg/mL，最終達到5 μg/mL。
  

• 如果篩選過程中漂浮OVCAR8細胞超過60%，應停止篩選，改用不含嘌呤黴素的培養(yang) 基培養(yang) 。待細胞密度恢複到80%左右後，可再次進行篩選。

• 當OVCAR8細胞能夠在5 μg/mL的嘌呤黴素條件下正常增殖時，可以停止篩選，改為(wei) 使用不含藥物的完全培養(yang) 基進行後續培養(yang) 。